基因治疗技术--腺病毒载体法
本帖最后由 黄帮主 于 2019-12-22 23:15 编辑病毒载体法进行基因转染是以病毒作为外源DNA导入的工具，通过病毒感染将外源DNA导入细胞。这种方法的最大优点是转染效率高，能实现对特定细胞的靶向性，目前用于基因治疗的研究中。
本帖最后由 黄帮主 于 2019-12-22 23:16 编辑
腺病毒是一类无包膜的双链线状DNA病毒，能引起人呼吸系统和胃肠道的良性感染，在人肿瘤细胞中未发现有腺病毒基因组的整合，对人类较为安全。利用腺病毒能感染多种类细胞，可插入较大的外源基因，容易获得较高滴度和病毒颗粒较稳定的优点，可将含目的基因的重组腺病毒经喷雾，气管内滴注等方法方便地导入体内进行基因治疗。
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本帖最后由 黄帮主 于 2019-12-22 23:16 编辑
腺病毒基因组的提取
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本帖最后由 黄帮主 于 2019-12-22 23:21 编辑
病毒纯化
应用各种物理或者化学方法，以不使病毒受损伤和失活为前提的条件下，提取出高纯度浓缩的病毒样品。
超速离心法是病毒纯化的一种常用方法。溶液内比溶剂密度大的部分产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在重力和浮力平衡的位置，集聚形成大分子带状物。因为病毒颗粒跟其他生物分子大小不一样，所以病毒在梯度离心过程中形成独特的条带，从而达到分离纯化的效果。
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腺病毒的结构形态 腺病毒具有特征性的二十面体病毒壳体。其病毒壳体含有 3 种主要蛋白，即六邻体（II）、五邻体基底（III）和纤突（IV）。腺病毒基因组 DNA 为线状双链，长约 30～38 kb，其 DNA 分子各含有 100～140 bp 反向重复（inverted terminal repetition，ITR）末端，5′端连接有末端蛋白（terminal protein，TP）。
腺病毒的转录 腺病毒五邻体上的纤突蛋白与两种细胞受体结合后，腺病毒 DNA 进入宿主细胞核。随后，病毒基因组立即开始进行早期 mRNA 转录。在转染 2～3 h 后，早期 mRNA 被翻译成 E2A 基因编码的 SSB 蛋白、E2B 基因编码的 DNA 聚合酶和 DNA 末端结合蛋白等数种早期蛋白，这些酶和蛋白都是腺病毒 DNA复制所必需的。
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