0010 分子生物学实验---常用溶液的配制
本帖最后由 黄帮主 于 2021-2-18 08:42 编辑储备液的配制
化合物必须是试剂纯或分析纯。
水尽量采用质量最好的水，最低限度是使用无菌水或蒸馏水。
液体配制后经过过滤除菌或者高压灭菌。
本帖最后由 黄帮主 于 2020-11-26 13:42 编辑
1M 氯化钙：
无水氯化钙（分子量：111) 22.2g溶于纯净水中，定容至200ml，0.22um滤膜除菌，分装后冻存。
1M 二硫苏糖醇（DTT）：
DTT(DL-二硫苏糖醇，脱水，分子量：154.25）1.5g溶于纯净水中，定容至10ml，分装后避光保存，-20℃长期冻存。
本帖最后由 黄帮主 于 2020-11-26 13:45 编辑
四环素(Tet)储存液(10mg/ml)：每100ml灭菌水中，加入2g四环素，充分溶解后，补加100ml无水乙醇，分装后-20℃保存，用时按照1:1000稀释。卡那霉素（Kan）储存液（50mg/ml）：每100ml纯净水中，加入5g卡那霉素，过滤除菌，分装后-20℃保存，用时按照1:1000稀释。氯霉素（Cm）储存液（50mg/ml）：每100ml无水乙醇中，加入5g氯霉素，分装后-20℃保存，用时按照1:1000稀释。氨苄青霉素（Amp）储存液（100mg/ml）：
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml，用针式过滤器过滤除菌，分装成小份于-20℃贮存，使用时按1：1000进行稀释。
链霉素（Str）储存液（100000单位/ml）：
溶解1瓶100,000单位的链霉素溶解于足量的水中，定容至10ml，用针式过滤器过滤除菌，分装成小份于-20℃贮存，使用时按1：1000进行稀释。
本帖最后由 黄帮主 于 2021-2-19 10:05 编辑
1M葡萄糖（20%）：将18g的葡萄糖粉末溶解在90ml的去离子水中，定容至100ml，用0.22uM滤膜过滤除菌，4℃保存。
本帖最后由 黄帮主 于 2021-1-17 13:17 编辑
PBS buffer (10 × ) ：
1L水中溶解2.4 g 磷酸二氢钾, 14.1 g 磷酸氢二钠， 2 g氯化氢，80g氯化钠。
使用时稀释成1×PBS，PH值约为7.4。
本帖最后由 黄帮主 于 2021-2-19 10:18 编辑
蛋白纯化需要配制的液体：
6×HIS裂解缓冲液：（用于裂解含6×HIS标签的重组蛋白）
50mM Tris-Hcl缓冲液，ph=8；10mM 咪唑；150mM 氯化钠；0.1% Triton-X 100；10%甘油；使用前加入PMSF，使其终浓度为200ug/mL。
6×HIS洗涤缓冲液：（用于洗涤含6×HIS标签的重组蛋白）
50mM Tris-Hcl缓冲液，ph=8；20mM 咪唑；150mM 氯化钠；
6×HIS洗脱缓冲液：（用于洗脱含6×HIS标签的重组蛋白）
50mM Tris-Hcl缓冲液，ph=8；50-500mM 咪唑；150mM 氯化钠；
TAE 电泳buffer (50 × ) ：
242g Tris
57.1ml冰醋酸（1M）
200ml EDTA(0.5M)
补水至1L 本帖最后由 黄帮主 于 2021-2-18 11:10 编辑
饱和硫酸铵的配制：
每100ml纯净水中加90g硫酸铵，70～80℃溶解，趁热过滤，降至室温后即有结晶析出，应任其留在瓶中。用2M的NaOH调节pH值到7-7.2。
本帖最后由 黄帮主 于 2021-2-19 10:16 编辑
常用细菌培养基：
① LB培养基（1L）：
10g 胰蛋白胨
5g酵母提取物
10g Nacl
补水至1L 高压灭菌
固体培养基：每200ml中加2.5-3g琼脂粉
② 2-YT培养基(1L)：
16g 胰蛋白胨
10g酵母提取物
5g Nacl
补水至1L 高压灭菌
固体培养基：每200ml中加2.5-3g琼脂粉
③ SOB(1L)：
20g 胰蛋白胨
5g酵母提取物
0.5g Nacl
10ml 250mM Kcl
200ul 5M NaOH
补水至1L，高压灭菌
使用前，加入无菌2M 氯化镁 5ml。
再加入20ml 1M葡萄糖，即为SOC培养基。
固体培养基：每200ml中加2.5-3g琼脂粉
多肽偶联缓冲液：
12水磷酸氢二钠 25.79 g
2水磷酸二氢钠 4.369 g
NaCl 8.775 g
EDTA 1.46 g
0.1 M PBS
以上试剂溶于900 mL 超纯水中，调整pH 值到7.2，最后定容至1 L。
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