pET系列载体
本帖最后由 黄帮主 于 2022-11-3 20:28 编辑Novagen 是德国 Merck KgaA集团子公司EMD 公司的品牌之一。
pET系列载体来自该公司。 本帖最后由 黄帮主 于 2022-11-3 20:36 编辑
T7启动子是当今原核表达系统的主流,功能强大,专一性高。
T7启动子完全专一受控于T7 RNA聚合酶。
T7 RNA聚合酶合成mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍。
当两者同时存在时,宿主本身基因的转录竞争不过T7 RNA表达系统。
几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白。
诱导表达后仅几个小时目的蛋白通常能占到细胞总蛋白的50%以上。
由于大肠杆菌本身不含有T7 RNA聚合酶,需要在大肠杆菌中引入外源的T7 RNA聚合酶。
因此T7 RNA聚合酶的调控模式就决定了T7系统的调控模式。
本帖最后由 黄帮主 于 2023-3-8 16:46 编辑
pET-22b(+) 载体N端携带pelB信号肽序列,能进行周质表达,C端有his标签。
f1复制原点,加辅助噬菌体可以产生包含单链DNA的病毒颗粒。
Amp抗性。
pET-28a-c(+)载体带有一个N端的His/Thrombin/T7蛋白标签,同时含有一个可以选择的C端His标签。
pET28a载体 kana抗性
pET-15b,amp抗性。
本帖最后由 黄帮主 于 2023-5-23 09:23 编辑
pET-32a(+)amp抗性
pET-25b质粒
amp抗性
pET-27b KANA抗性
超声缓冲液:
01006 buffer A:50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl
来自SFV的Capsid蛋白N端前34个aa具有促进蛋白质翻译功能。MNYIPTQTFYGRRWRPRPAARPWPLQATPVAPVV
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