pET-20b（+）：3716bp
含pelB信号肽序列，但是pET20b没有lac operator, 即无AATTGTGAGCGGATAACAATT序列，可以不用IPTG进行诱导表达。
414：pET-21a（+）5443bp，Amp抗性
419 pET-30a（+）5422bp kana抗性
pET-3A 4640BP
碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的的。碱性使质粒DNA变性，再将pH值调至中性使其复性，复性的为质粒DNA，而染色体DNA不会复性，缠结成网状物质，通过离心除去。
金属螯合亲和层析是利用蛋白质表面暴露的一些氨基酸残基和载体之上的金属离子之间的相互作用而进行的亲和纯化。
这些氨基酸残基包括组氨酸、色氨酸、赖氨酸等。组氨酸的咪唑侧链可亲和结合镍、锌和钴等金属离子，在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白可与金属螯合亲和层析柱结合，在低pH下用咪唑竞争洗脱，且6×组氨酸标签只有6个氨基酸，分子量很小，可以根据需要通过酶切去除。
利用金属螯合亲和层析柱的这些特性，将带有His标签的目的蛋白与其它大量杂蛋白分离，并在亲和层析柱上应用凝血酶完成对标签的切割。
IPTG的作用：是一种含硫的乳糖类似物。这种类似物在没有乳糖的条件下，它可以诱导细胞合成β-半乳糖苷酶。所以我们称IPTG为β-半乳糖苷酶的诱导剂，亦即不发生代谢变化的诱导物。在X-gal显色反应中，β-半乳糖苷酶同样也需要诱导X-gal：无色的底物，可以被β-半乳糖苷酶切成半乳糖和深蓝色的底物-靛蓝。
Lac I：TTGTGAGCGGATAACAA在大肠杆菌中，lac抑制因子(阻碍物）与lac操纵子结合以抑制转录。这种抑制作用通过添加乳糖或异丙基- β - d -硫代半乳糖苷（IPTG）来缓解。
本帖最后由 黄帮主 于 2025-11-23 21:21 编辑
pQE-30Xa 原核表达系统
具有优化的启动子－操纵元模式，包括：
① 来自噬菌体的 T5启动子（由大肠杆菌的 RNA 聚合酶识别）和两个乳糖操纵子识别序列，以保证与乳糖抑制子的结合从而抑制 T5 启动子的表达；
② 合成的核糖体结合位点 RBSⅡ，保证高效的翻译；
③ 有多个终止密码子，无论你的片段从多克隆位点的哪里插入都可以正确的终止，可以有效预防转录中的通读现象并保证表达质粒的稳定性；
④ 质粒含有 β-内酰胺酶（bla）基因，因此具有氨苄霉素抗性；
⑤ ColE1复制起点；T5 噬菌体启动子的下游为 6 个组氨酸标签（Tag），该标签比普通的标签要小得多，在 pH8.0 时不带电，几乎没有什么免疫原性，重组蛋白可以不需要出去标签直接作为抗原进行免疫，也可利用 Xa 因子蛋白酶很方便地将 6×组氨酸标签有效地切除，经多种融合蛋白验证对蛋白的分泌、折叠和结构，甚至功能几乎没影响，能够高度亲和 Ni 离子，更有利于融合蛋白的纯化。
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