黄帮主 发表于 2022-10-2 15:51:24

原核表达载体

原核细胞中高效表达外源基因,需要一个强的原核启动子,是指导RNA转录起始的一段DNA序列。启动子需要有被调控的功能:① 强的不可调控的启动子在大肠杆菌中不稳定;② 某些外源性蛋白对宿主细胞可能有毒性;③ 短时间内快速合成外源蛋白质,可以减少宿主细胞溶蛋白酶的破坏作用。


黄帮主 发表于 2022-10-2 15:54:01

需要一个能指导高效翻译成蛋白质的序列,即SD序列,这段序列位于起始密码子上游3-9个核苷酸处,与16s rRNA的3‘端互补,SD序列的组成及其与AUG之间的距离,显著影响翻译水平。

黄帮主 发表于 2022-10-2 15:56:43

强的转录终止序列对稳定宿主-载体系统很重要,避免发生通读所造成的质粒不稳定。大肠杆菌的转录终止有依赖和不依赖rho蛋白的两种形式,在表达载体上最好是不依赖rho蛋白。

黄帮主 发表于 2022-11-3 20:13:46

最早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵子。
由启动子Plac,操纵基因Lac0,结构基因组成。
其转录受CAP正调控,和Lac I负调控。

黄帮主 发表于 2022-11-3 20:28:21

IPTG广泛应用于诱导表达系统,但是IPTG有一定的毒性。



黄帮主 发表于 2022-11-10 23:01:20

PBV220是一个含PrPl启动子的原核高效表达载体,同时含有cI调控基因,多酶切点,和两个强的转录终止序列。
外源基因加入起始密码子,终止密码子,表达非融合蛋白。
表达量可以占到菌体总蛋白的20%以上。
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