原核表达载体

黄帮主

原核细胞中高效表达外源基因，需要一个强的原核启动子，是指导RNA转录起始的一段DNA序列。

启动子需要有被调控的功能：

① 强的不可调控的启动子在大肠杆菌中不稳定；

② 某些外源性蛋白对宿主细胞可能有毒性；

③ 短时间内快速合成外源蛋白质，可以减少宿主细胞溶蛋白酶的破坏作用。

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需要一个能指导高效翻译成蛋白质的序列，即SD序列，这段序列位于起始密码子上游3-9个核苷酸处，与16s rRNA的3‘端互补，SD序列的组成及其与AUG之间的距离，显著影响翻译水平。

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强的转录终止序列对稳定宿主-载体系统很重要，避免发生通读所造成的质粒不稳定。大肠杆菌的转录终止有依赖和不依赖rho蛋白的两种形式，在表达载体上最好是不依赖rho蛋白。

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最早应用于的表达系统是Lac乳糖操纵子。
由启动子Plac，操纵基因Lac0，结构基因组成。
其转录受CAP正调控，和Lac I负调控。

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IPTG广泛应用于诱导表达系统，但是IPTG有一定的毒性。

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PBV220是一个含PrPl启动子的原核高效表达载体，同时含有cI调控基因，多酶切点，和两个强的转录终止序列。
外源基因加入起始密码子，终止密码子，表达非融合蛋白。
表达量可以占到菌体总蛋白的20%以上。