三种不同腺病毒基因组提取方法对全基因组克隆构建的影响分析

黄帮主

讨论 摘抄
病毒全基因组限制性酶切分析(REA)是一种简单而且花费少的腺病毒基因型鉴别的方法．广泛用于腺病毒流行病学调查研究及基因工程腺病毒的分型鉴定中。REA实验的进行需要提取高质量的腺病毒全基因组，目前国际上通行的腺病毒基因组提取方法是改良的Hirt S法，该方法虽然避免了大量培养细胞的过程，但依然耗时耗力。

Hirt‘S法则直接从培养的腺病毒感染细胞中抽提病毒基因组，不需要纯化病毒：改良的Hirt’S方法冰浴孵育沉淀细胞基因组的时问可缩短至l h，目前大部分商品化试剂盒是用离心柱吸附病毒基因组，优点是方法简便，不需要使用有机试剂酚／氯仿抽提；缺点是只能用于非细胞样品，这是因为是细胞样品中大量的宿主基因组不易去除。


两种试剂盒方法和Hirt s法提取的腺病毒基因组都可以用于转染实验和细菌内同源重组实验。


文献看完后，还是一点没有明白，使用试剂盒提取时，病毒用量是多少？TAKARA试剂盒和ROCHE试剂盒官方protocol每管起始体积只有200ul，60mm培养皿的病毒感染细胞是如何浓缩到200ul左右的？