Identification of a critical neutralization determinant of severe acute respi...

米小圈

杂交瘤技术制备抗SARS的小鼠单抗 (MAbs)
SARS灭活病毒免疫小鼠，用杂交瘤技术筛选到两株单抗1A5 (IgG1/k)和2C5 (IgG1/k)分别用ELISA实验，竞争结合实验，受体阻断实验对抗体进行评价。

米小圈

用抗原RBD-Fc/S1-C9/, DTT处理的抗原RBD-Fc/S1-C9/作为包被抗原，检测和鼠抗的结合活性。

两株鼠抗均和抗原RBD-Fc/S1-C9结合，但是和DTT处理的抗原不结合，说明两个鼠单抗均识别RBD的S蛋白空间表位，并且在竞争试验中两种单抗互相不影响，说明两个抗体识别的不是同一个表位。

米小圈

通过流式可检测鼠抗对RBD-Fc和293T/ACE2上的ACE2结合能力有无影响。
左图实验结果表明：
2C5能抑制ACE2和RBD-Fc的结合，说明2C5识别表位和S蛋白的受体结合位点有重叠区.1A5则不影响ACE2和RBD-Fc的结合
右图实验结果显示：
两个鼠抗都能和SARS假病毒颗粒产生中和活性反应，说明S蛋白RBD区的不同抗原表位能有效诱导产生中和抗体。

米小圈

讨论部分：
通过免疫吸附，将患者血清或者免疫兔血清进行分离，洗脱部分主要为抗RBD抗体，证实为血清中产生中和抗体的主力军。说明S蛋白RBD区是主要的中和抗原决定簇。
冠状病毒感染细胞的第一步是通过S蛋白RBD区和细胞上特异性的受体结合。
可以通过检测阻断受体结合或病毒进入而评价中和抗体的有效性。
SARS灭活疫苗在中国进行临床实验，但是其缺点在于大量的病毒成分能诱导产生有害的免疫和/或炎症反应。有文献报道这些自身免疫反应是由人血清中含量丰富的糖蛋白诱发产生的。此外，痘病毒载体包装的全长S蛋白作为疫苗免疫实验动物后，再次用病毒感染，会导致严重的肝损伤。