Identification of two linear B-cell epitopes from West Nile virus NS1 by scre...

真核表达

单抗3C7和4D1用WB检测表达的小短肽

MBP-CP-1(含CP-1肽的MBP-融合多肽：LTATTEK)和MBP-CP-2(含CP-2肽的MBP-融合多肽：TATTEK)被MAb 3C7识别

MBP-DP-1(MBP-融合多肽含有DP-1肽：VVDGPETKEC)被MAb 4D1识别

说明TATTEK和VVDGPETKEC分别是3C7和4D1识别的线性表位。

真核表达

WNV/JEV阳性血清对已鉴定的两个NS1表位（CP-2和DP-1）进行WB鉴定

WNV阳性马血清能识别这两个表位(图6a，b)

WNV阴性对照马血清则不识别(图6c，d) )。

进一步的交叉反应检测表明，

多肽Dp-1(VVDGPETKEC)可以与6个JEV阳性马血清反应(图6e)，

但CP-2(TATTEK)不能被任何JEV阳性马血清所识别(图6f)。

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序列相似性和交叉反应性

从18个不同WNV分离株NS1序列的分析表明，3C7表位TATTEK在包括昆津病毒株和WNV谱系5株在内的WNV I系中高度保守的（EU249803；图7a）。

在WNV系2、3和4株中存在有限的氨基酸突变(图7a)。 值得注意的是，序列基序在Flaviviridae家族的其他成员中不保守，包括JEV血清复合物的其他病毒(图7a)。

我们还对4D1mAb识别的最小线性表位进行了序列比对。 基序VVDGPETKEC是JEV系列成员的共同表位，包括WNV、JEV、MVEV和SLEV  但没有非JEV的Serocomplex成员的家庭(图7b)。

真核表达

讨论部分：
黄热病毒属病毒NS1蛋白是 一个重要的非结构蛋白，参与病毒基因组RNA的复制，宿主识别的病毒相关分子模式，抗病毒的保护性免疫等等。
NS1可以做为研制疫苗的靶抗原。

病原相关分子模式（pathogen-associated molecular patternsPAMP）是模式识别受体（PRR）识别结合的配体受体，主要是指病原微生物表面某些共有的高度保守的分子结构，如G-菌的脂多糖，G+菌的寡肽糖和真菌的酵母多糖等；也包括宿主凋亡细胞表面某些共有的分子结构，如磷酯酰丝氨酸等。PAMP数量有限，但在病原微生物中分布广泛。

真核表达

单抗表位的鉴定有利于研究抗原结构，研发诊断和治疗试剂，如表位疫苗。
本研究中，NS1单抗表位的鉴定P有利于理解NS1介导的保护性免疫机制。
鉴定到的线性表位为研发表位疫苗提供依据。
本研究中，以两个针对NS1的高效中和活性抗体为研究对象，利用噬菌体肽库技术，寻找NS1上其相应的线性表位。
最终确认为TATTEK和VVDGPETKEC。
NS1上的表位和E蛋白上的表位相比较，保守性要弱些，因此不容易产生交叉结合活性，更适合做血清诊断试剂，提高特异性。