泛素基因介导下的猪繁殖与呼吸综合征病毒M 基因对小鼠的免疫试验

米小圈

泛素基因介导下的猪繁殖与呼吸综合征病毒M 基因对小鼠的免疫试验

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摘要：
构建猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus , PRRSV)M蛋白基因及其与泛素(Ubiquitin , Ub) 基因融合的真核表达质粒，并进一步研究Ub 对M 基因免疫效果的影响。
泛素在一定程度上可以促进PRRSV M基因诱导细胞免疫反应,但对体液免疫未见到同样作用。

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20 世纪90年代以来，PRRSV 猪繁殖与呼吸综合征病毒几乎传播到世界上所有养猪的国家，严重阻碍了世界养猪业的发展。
M蛋白是PRRSV 的膜基质蛋白,也是北美洲和欧洲株结构蛋白中最为保守的蛋白。
M蛋白具有较强的免疫原性,可诱导产生一定的中和抗体和特异性细胞免疫应答 ,因而是DNA 疫苗重要的候选基因。
本研究用构建的pVAX1-M、pVAX1-U-M 重组质粒DNA 免疫小鼠，探讨PRRSV M 蛋白在免疫中的作用、泛素的功能，为PRRS 新型疫苗的研究提供基础数据。

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实验材料:
PRRSV CH21a 株
PRRSV 阳性血清、PRRSV 阴性血清、抗PRRSV M 蛋白单抗
AKAV OBE21 株种毒
JM109、DH5α、BL21 (DE3)感受态细胞、BHK-21 细胞
pVAX1 质粒、pGEX-6p-1 质粒
FITC标记的兔抗猪IgG抗体、辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG抗体、辣根过氧化物酶标记兔抗猪IgG抗体、PE 标记的大鼠抗小鼠CD8a 抗体、PerCP 标记的土拨鼠抗小鼠CD3e 抗体。

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构建M截短蛋白的原核表达载体pGEX-6P-M

蛋白表达为包涵体表达，M截短蛋白-GST融合蛋白大小约为36kDa，WB检测阳性。

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构建真核表达质粒pVAX-M（只有M基因）与pVAX-U-M（是Ub-M的融合基因）。将重组质粒转染BHK-21 细胞后, IFA 实验进行检测，抗PRRSV 阳性血清作为一抗，pVAX-M、pVAX-U-M在真核细胞能表达目的蛋白。