'Knobs-into-holes' engineering of antibody CH3 domains for heavy chain

傲慢与偏见

'Knobs-into-holes' engineering of antibody CH3 domains for heavychain heterodimerization

傲慢与偏见

杵臼结构：最早是1952年Crick 提出的α螺旋之间由氨基酸侧链形成的一个模型结构。
本研究中，将这个模型运用到抗体重链的设计中。
将CD4抗体的重链CH区小氨基酸替换成大氨基酸（如T366W）而形成一个knob结构。
在一个人源化的CD3抗体C3H区将小氨基酸替换成大氨基酸（如Y407T）则形成一个hole结构，将其插入到Hole（大氨基酸被小氨基酸替换）中，这是第一个进行双抗重链组装的技术平台。
当两个野生型的重链和CD3抗体轻链共表达细胞，能产生57%的抗CD3/4的双抗特异性抗体。
而将两个突变为杵臼结构的重链和CD3抗体轻链转染细胞共表达时，能产生92%以上的双特异性抗体。
该技术很大程度上解决了轻重链错配问题，这是第一个进行双抗重链组装的技术平台。迄今为止，仍广泛应用于带Fc段的双特异抗体研制技术中。

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Genetech公司为了降低仍然存在的位阻效应，研究者对该技术进行了改良，改良后的 KIH（一条链 S354C，T366W；另一条链 Y349C T366S L368A Y407V 还引入了一对链间二硫键。

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