制备常用抗体的相关实验

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EB病毒转化建立分泌人单抗B淋巴细胞系

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06015：
杂交瘤技术免疫小鼠(Balb/c)：
① 首次免疫：F1抗原（100ug)+等量福氏完全佐剂。小鼠背部皮下注射；
② 三周后二次免疫：F1抗原（减半量）+等量福氏不完全佐剂，小鼠背部皮下3-4点注射；
③ 三周后三次免疫：同二次免疫；
④ 免疫后约三周取小鼠尾血测定免疫效果，检测F1抗体；
⑤ 融合前三天，选F1抗体效价最高的小鼠，腹腔注射F1抗原100ug，加强免疫1次。

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06022：
细菌外膜蛋白液的制备：
① 接种细菌至LB培养基中，37℃，振摇48小时；
② 用PBS洗菌团，将菌悬液超声破碎；
③ 10000rpm离心30min，收取上清。

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06022:
小鼠腹水粗提抗体：
① 取小鼠腹水5ml，加入5ml的生理盐水，混匀；
② 向其中逐滴加入5ml饱和硫酸铵溶液，4℃静置4小时；
③ 15000rpm/min离心20min，弃上清，以9ml生理盐水溶解沉淀，混匀；
④ 向其中逐滴滴加3ml饱和硫酸铵溶液，4℃静置过夜；
⑤ 15000rpm/min离心20min；
⑥ 将上清装入透析袋，在pH=7，0,005mol/L的氯化钠溶液充分透析；
⑦ 调整溶液蛋白质量浓度至1mg/ml。

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IgY 是蛋黄免疫球蛋白的英文简称，是用特定抗原对产蛋鸡进行多次免疫，诱导蛋鸡法氏囊B细胞分化成浆细胞，分泌特异性IgY进入血液，血液流经卵巢时转移进入卵黄中的特异性免疫球蛋白。
鸟类血清中有3类免疫球蛋白：IgA、IgM和IgY，蛋清中主要有IgA、IgM，因IgY分子较小，可以与卵黄膜特异性结合而进入卵黄，卵黄中主要为IgY。
IgY与IgG基本结构相似，均由两条重链与两条轻链组成。IgY重链由1个可变区与4个恒定区组成，而 IgG 重链由 1 个可变区与 3 个恒定区组成；IgG有一个铰链区，而IgY没有铰链结构，结构更为稳定。IgY分子量为180 千道尔顿，而IgG分子量为150 千道尔顿。
IgY疏水性较IgG强。IgY等电点在pH值5.7~7.6之间，而IgG等电点位于6.1~8.5之间。

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IgY抗体的制备：
从鸡蛋黄中纯化IgY抗体，从一个鸡蛋中分离出蛋黄，加入到50ml离心管中，加入2倍体积的PBS，加入终浓度为3.5%的PEG6000，混匀后，4℃，13000g离心10min，离心后取上清。
加入终浓度为8.5%的PEG6000，混合均匀，4℃，13000g离心10min，弃上清。
用10ml PBS重悬沉淀，加入终浓度为12%的PEG6000，混匀后，4℃，13000g离心10min，弃上清。
用800ul的PBS重悬沉淀，透析去除PEG6000，SDS-PAGE进行蛋白电泳。