骆驼血清/驼奶中抗体的分离鉴定

黄帮主

① 配制洗脱液

A：150mM 氯化钠，0.58%乙酸，pH=3.5；

B：100mM 甘氨酸-Hcl，pH=2.7；

C：0.1M 柠檬酸；

② 上样：5ml骆驼血清+5mlPBS等比例稀释；以5ml/min流速上柱（proteinG），收集流穿液，加3-5个柱体积的PBS进行柱平衡；

③ 加洗脱液A进行冲洗，冲出的液体中含IgG3；

④ 加洗脱液B进行冲洗，冲出的液体中含IgG1；

⑤ PBS充分冲洗柱子后，再将②中流穿液重新上柱，充分去除残留的IgG1和IgG3，再次收集流穿液；

⑥ 将⑤中的流穿液上Protein A柱，加3-5个柱体积的PBS进行柱平衡；

⑦ 加洗脱液A进行冲洗，冲出液体中含IgG2a；

⑧ 加洗脱液C进行冲洗，冲出液体中含IgG2b；

⑨ 将纯化后的抗体液加1MTris进行中和(pH=9.0)，脱盐，用PBS进行置换，4℃可保存数周。

黄帮主

骆驼奶干旱地区重要膳食，具有丰富的营养和药用价值。
不同于其他哺乳动物的奶，如牛奶，羊奶，骆驼奶中含有较低的脂肪、胆固醇，乳糖和更高的矿物质，维生素。
此外，骆驼奶含有多种保护蛋白，主要有免疫球蛋白、溶菌酶、乳铁蛋白和乳过氧化物酶，具有抗菌，抗病毒和免疫特性，以恢复免疫系统的活力。
其中，IgG的水平远高于其他哺乳动物的奶，驼奶具有很强的抗感染能力和清除能力。
驼奶中的IgG分子很小，进入肠道中的驼奶容易通过血脑屏障，进入到血液循环中。

黄帮主

采集8个健康泌乳奶牛的骆驼奶，20℃保存。
取40ml驼奶，4℃，425g离心60min，弃去上清和下层沉淀，保留中间层液体，主要是乳清蛋白。
0.22μm针孔过滤，去除漂浮的脂肪和固体沉淀。
过滤后液体用PBS(0.02 mol/L, pH 7.4)五倍稀释。
在10ml的Protein A柱上上样，用0.1M甘氨酸-Hcl(pH 2.4)冲洗, 加1 mol/L Tris–HCl (pH 9.0)调节pH至7.4.
纯化的IgG超滤后进行置换和浓缩。

黄帮主

对总IgG进行分次纯化，PBS五倍稀释总IgG，在10mL蛋白G,FF柱上样，留流穿液。用0.15M NaCl, 0.58%乙酸(pH 3.5)，0.1 M甘氨酸HCl (pH 2.7), IgG1和IgG3被洗脱下来。
流穿液在10 mL蛋白A FF柱上柱，用0.1M 甘氨酸HCl (pH 2)将IgG2洗脱出来。各成分的蛋白液立刻用1 mol/L Tris–HCl (pH 9.0)进行中和，调整pH至 7.4。
超滤，将各蛋白液进行浓缩和液体置换。

phoenix_eagle

好奇问一下，羊驼的RNA在细胞层面是否比人的RNA含量要低，我们在很多物种都发现了这个特点。人类的RNA还是含量高很多。