single domain antibodies：methods and protocols

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诱导共刺激因子配体 (ICOSL)与共刺激因子 (ICOS) 相互作用，在 T 细胞活化过程中起着重要作用。通过阻断这种相互作用可以抑制 T 细胞的完全活化，从而改善疾病症状。

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眼疾靶点：
由于眼部特殊的构造，抗体等大分子药物穿透性不够，用药途径困难，VNARs分子小，穿透性好，可以尝试用于治疗眼部疾病。
① Kovaleva 等利用 ICOSL 免疫护士鲨建立免疫库，进一步淘选得到特异性识别 ICOSL 的 VNAR。用角膜划伤的小鼠模型研究了 VNAR 穿越组织的能力，通过滴加的方式给小鼠模型用药，药物包括 VNAR、 VNAR-Fc 以及 mAb，给药20 min 之后，观察到只有 VNAR 可以穿透角膜，在小鼠眼睛的前房能检测到。
② 利用免疫角鲨噬菌体库的抗vegf165 VNAR，在视力健康的新西兰兔眼部局部使用，3h可在房水中检测到VNAR。

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2022版 第二章鲨鱼抗体原文

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2012版 第三章 鲨鱼抗体原文

Vincent

傲慢与偏见 发表于 2022-8-28 22:30
VH和VHH氨基酸序列高度一致，和人的VH3基因有80%高度的同源性。
另外，单峰驼发现少量的VH和人类的VH4高度 ...

请问一下，目前VHH抗体开发的话，有需要涵盖VH4同源的序列么？ 有没有VH4同源的VHH序列在进行药物开发呢？

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第四章
Creation of the Large and Highly Functional Synthetic Repertoire of Human VH and Vk Domain Antibodies

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第五章 天然纳米抗体库的构建

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第六章 纳米抗体的淘选
每一章的学习，都能学到新的知识，受到新的启发。
虽然这本书是2012年的，但是对于基础比较差的我来说，还是很有收获。

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值得注意的是：构建纳米抗体库前的动物免疫策略也非常重要，不同的免疫策略决定了在免疫动物体内抗体的形成，构建免疫库的质量。免疫方案结合淘选方案，决定了筛选抗体的特异性，亲和性以及识别抗原表位的能力。
为确保完整的膜蛋白能呈现出天然构象的状态，用全细胞免疫动物，比纯化的蛋白，蛋白结构域或衍生肽免疫动物更有效。
基质干扰物产生的免疫反应对于抗体的筛选增加负担，有减少基质干扰物影响，使免疫反应更偏向针对靶标蛋白的构象表位，同时减少对基质干扰物的免疫反应，可以采用靶蛋白表达质粒进行动物免疫，或者是采用免疫动物同种类来源的细胞表达靶蛋白进行全细胞免疫。
用于淘选的抗原一个基本原则是尽量保证抗原的构象不发生改变，这对于成功淘选得到识别空间表位的抗体很重要。下面的实验部分内容是根据淘选用抗原形式不同，如提纯抗原（蛋白，半抗原，和载体蛋白连接的多肽等），和递呈抗原的形式不同（如膜抽提物，病毒样颗粒，脂质体，全细胞）对不同的淘选方案进行详细描述。

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纳米抗体免疫文库的构建
方法采用Golden Gate无缝连接，其实duck不必，我们公司自己改造的载体就很好用。