Potent Neutralization Ability of a Human Monoclonal Antibody

潇湘妃

乳鼠保护实验
100ul浓度为100ug/ml，10ug/ml，1ug/ml的抗体与200LD50的登革病毒等体积混合，37℃孵育1小时。
脑内注射1日龄乳鼠，每只接种10ul，每种浓度/病毒接种一窝乳鼠（10只左右）。
观察21天，每天记录发病和死亡情况，计算存活率。
Kaplan–Meier 生存分析曲线如下图 (***p < 0.001)。

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治疗效果评价：
在1日龄小鼠脑内接种10*LD50的登革病毒DENV-1/DENV-2（5ul），感染6小时后再脑内注射5ul浓度1ug的抗体HMAb 1G5, 观察21天，每天记录乳鼠发病和死亡情况。


1G5针对DENV-1的攻击，1ug/只的剂量可以保护60%的乳鼠，对DENV-2的攻击，有30%的保护效力。

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抗体1G5体外的抗体依赖的感染增强(ADE）活性检测
参考以往文献的报道，本研究制备了两株突变体，一个是在抗体重链Fc段编码序列的234-235位引入LALA突变，一个是缺失231-239位九个氨基酸。
抗体依赖的感染增强检测：
1. 抗体1G5以及突变型抗体调整浓度至30ug/ml，4倍稀释，设置12个梯度。
2. 将250ul倍比稀释的抗体与20000pfu的登革病毒等体积混合，37℃孵育1小时。
3. 将500ul抗体病毒混合物加入500ul密度为400000/ml的K562细胞中，MOI=0.1，37℃继续孵育2小时。
4. 混合液于1000rpm离心10min，弃去上清，PBS缓冲液重悬细胞沉淀，1000rpm离心10min，弃上清，重复2-3次。
5. 用1ml的含2% FBS的RPMI-1640细胞维持液重悬，转移到12孔板， 37℃孵育4天。
6. 细胞悬起，2000rpm离心10min，收集细胞上清，感染BHK-21细胞，空斑法测定病毒滴度。

结果可见突变体已经彻底消除抗体依赖的感染增强活性。

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讨论部分 摘抄
Dejnirattisai et al. (2015) 用FACS技术分离145株HMAbs（DENV）。
本研究中从1056个单细胞中分离到285对轻重链基因。其中88株对DENV有特异性，所有抗体为IgG1型。
1G5抗体针对DENV-1有很强的体外中和活性和体内保护效力。
中和活性和de Alwis筛选到的14C10/1F4很相似。
1G5除了对DENV-1有中和作用，对DENV-2亦有中和作用。
对1G5的Fc段进行改造，有效去除了抗体诱发产生的ADE。
但是改动有可能引起其他免疫反应，如ADCC
表外尚未检测出来。