电转，化学转化感受态的制备 常见感受态种类及应用

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感受态细胞(competent cell)是经过一些特殊方法(如电击法、Cacl2、Kcl等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的状态。利用低渗溶液处理细胞悬浮液微生物细胞膜结构发生变化，使得细胞在热激时（42℃，90s）变得很容易从溶液中摄取DNA。

细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，会膨胀成球形，细胞膜的通透性发生变化，转化混合物中的外源DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热激处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增值，在选择培养基上便可获得所需的转化子。

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氯化钙法化学感受态的制备

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细菌生长到对数中期时，用冰冷的超纯水在低温下多次洗涤细菌，然后用低离子浓度并且含有甘油的溶液重悬，使细胞悬浮液中含有尽量少的导电离子，可以制备高转化效率的电转化感受态。在使用感受态细菌进行DNA转化时，利用瞬间高压在细菌上打孔，可以使DNA在短暂的高压电击时进入细菌中。

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制备电转化感受态细菌

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感受态细胞(competent cell)是经过一些特殊方法(如电击法、Cacl2、Kcl等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性的改变,成为能允许外源DNA分子进入的状态。利用低渗溶液处理细胞悬浮液微生物细胞膜结构发生变化，使得细胞在热激时（42℃，90s）变得很容易从溶液中摄取DNA。

细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，会膨胀成球形，细胞膜的通透性发生变化，转化混合物中的外源DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热激处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增值，在选择培养基上便可获得所需的转化子。

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制备化转感受态细菌

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TG1菌株带有F’质粒，为脯氨酸原养型，可在不含脯氨酸的培养基，如M9基本培养基上形成克隆。菌株在基本培养基上生长远慢于在丰富培养基中，而且不能在4℃储存条件下长期存活。因此，必须每隔一周再用-70℃保存的原种接种M9培养基琼脂平板，TG1菌种用含15%甘油的LB培养基进行保存，冻存于-70℃。

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制备TG1感受态细菌

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JM110细菌
甲基化基因dam，dcm缺失突变株，在其内扩增的质粒无法进行甲基化，被甲基化的质粒（甲基化敏感酶切不开，如Cla I，Bcl I）重新转化一下这种感受态，可以去除甲基化。

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Rosetta（DE3）感受态
具有氯霉素抗性，可以补充6种稀有密码子的tRNA（精氨酸 Arg R: AGA AGG，异亮氨酸 Ile I: AUA， 脯氨酸 Pro P CCC， 亮氨酸Leu L：CUA，甘氨酸 Gly G:GGA），适合有稀有密码子基因的原核表达。

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OrigamiB（DE3）
用于原核表达的感受态，增加蛋白表达的可溶性，但是本身细菌有卡那霉素和四环素抗性，所以转化的质粒不能有KANA或者TET抗体基因。

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BJ5183细菌
进行同源重组的细菌，是目前腺病毒系统最常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变，菌株本身具有链霉素抗性。

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WK6菌株
表达菌株，常见于纳米抗体的周质表达。