分子克隆中常规实验操作

黄帮主 · 发表于 2019-11-6 16:47:56

电转化感受态的制备

黄帮主 · 发表于 2019-11-6 16:49:44

制备电转化感受态细菌是在培养细菌生长到对数中期时，低温下用冰冷的超纯水多次洗涤，然后用低离子浓度并且含有甘油的溶液重悬，使细胞悬浮液中含有尽量少的导电离子。其后利用瞬间高压在细胞上打孔，可以使DNA在短暂的高压电击时进入细菌当中。

实验流程见附件

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黄帮主 · 发表于 2020-7-2 21:04:26

DNA分子越长，和纯化膜的结合力越强，洗脱力越差，在离心过柱时可能被“扯断”，因此常规的离心过柱的方法并不适合大片段DNA 的回收。用商品化试剂盒对分子大小超过10kb的DNA，进行片段纯化或者凝胶电泳回收纯化时，效率非常低。可以用经典的乙醇沉淀法进行大片段DNA的回收，效率很高，对DNA分子的完整性几乎没有影响。

详版见附件
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乙醇沉淀法回收大片段DNA

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