Reverse genetics with a full-length infectious cDNA of severe acute respiratory

米小圈

冠状病毒基因组5'端5'-UTR大约为200-500个nt。3'-UTR也大约为200-500nt作用，其后有一个poly（A)序列。
3‘端有一系列的ORFs，每一个阅读框起始AUG前端是一段小的重复转录调节序列（TRS)。
基因组5’端位于第一个TRS之前的序列称之为前导序列（LEADER SEQUENCE）。
Urbani序列中的TRS可能是保守序列CUAAAC，或者AAACGAAC

米小圈

冠状病毒基因组的复制模式：（Sawichi 1996）

冠状病毒基因1，ORF1即复制酶，占基因组的2/3，由ORF1a和ORF1b两个重叠基因构成。
ORF1翻译产物形成复制酶，参与基因组全长互补负链的复制。
复制酶可以识别基因组内部TRS或TRS附近的位点，可以越过一大段两个TRS之间的序列，从而负链RNA再转录为正链RNA和一组mRNA，这一组m'RNA即称为亚基因组mRNA。
复制酶（replicase）：复制转录复合体（replication/transcription complex, RTC）中识别基因组并合成负链。复制酶仅识别基因组模板，复制出基因组大小的负链模板和亚基因组模板；
转录酶（transcriptase）：识别负链（基因组大小和亚基因组大小的）并且合成正链。转录酶同时识别基因组大小的负链模板和亚基因组模板，复制成基因组和亚基因组mRNA。
由于只有基因组可以作为亚基因组负链模板合成的模板，所以复制信号应当仅存在于基因组中，而亚基因组中没有。与之对应的是，负链基因组和亚基因组似乎都包含转录信号，决定了他们作为模板合成正链的能力。

米小圈

验证拯救病毒中添加或者去除的Bgl I酶切位点，和预期一致

米小圈

拯救病毒和野生株Urbani相比较，复制能力相似，和TOR-2/TOR-7病毒相比较，复制能力略下降。提取RNA，RT-PCR获得的mRNA反转录片段，至少有8种不同的序列，如图，属不同的基因ORF
分析得CS序列为ACGAAC
冠I保守序列为CUAAAC(TGEV)
冠II保守序列为UCTAAAC（MHV）
冠III保守序列为CUUAACAA（IBV）
如图C和D，拯救病毒和野生株一样，受E64-d影响。
E64-d是一个半胱氨酸蛋白酶抑制剂，能阻断复制酶的加工多蛋白功能，从而影响病毒RNA合成和病毒合成，但是不影响细胞的RNA合成。