ELP30-tag蛋白纯化能力的原核表达研究

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因为重组蛋白含有内含肽，重组蛋白在诱导表达时出现了胞内自切割现象，蛋白纯度并不是很好。

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讨 论
ELPn的Tt值受n，缓冲液中盐离子种类和浓度的影响。通过向样品溶液中加入一定浓度的盐离子，可以将Ｔt降至室温以下，以便能在室温环境触发ELP相变，ITC纯化获得含ELP标签的重组蛋白。
离心法和滤膜截留法是ELP标签蛋白纯化的实验手段，都需要几轮相变循环才能得到纯度较高的蛋白，但是回收率下降。
去除重组蛋白的标签常规需要特异的蛋白酶，但蛋白酶价格昂贵，稳定性差（其实稳定性还好），反应温度苛刻（合适的温度有利于提高切割效率），存在非特异性酶切（常用的蛋白酶特异性还是不错的）等缺点，并且在酶切反应完成后，需要额外的层析步骤将蛋白酶去除，相比之下，内含肽具有断裂诱导条件简单、断裂位点特异和不向反应体系中引入蛋白杂质等优点，被视为蛋白酶的潜在替代品（但是内含肽有胞内自切割现象，不利于蛋白的纯化）。