Identification of a Neutralizing Monoclonal Antibody That Recognizes a Unique

傲慢与偏见

Mab 12F11抗原表位的鉴定：
表达了17个GST融合的截断蛋白，原核表达载体选用的是 PGEX-6P-1。17个蛋白均能表达，大小和预期一致

傲慢与偏见

用抗-GST标签的抗体进行WB检测，均能显示出蛋白条带（图C和D）。
而用12F11单抗检测，只能识别部分蛋白（图E和F）
其中N端蛋白识别AA2–109, AA 4–109, AA 6–109, 以及AA 8–109位
C端蛋白识别AA 1–100, AA1-90, AA 1–80, AA1-78，AA1-77位
以此为基础，表达AA8-77位氨基酸，结果WB显示能和12F11结合。

傲慢与偏见

病毒吸附前后抑制实验：
冰预冷的DMEM稀释病毒至40pfu/100ul。5倍系列稀释纯化的12F11单抗至5个梯度。
24孔板中培养BHK-21细胞至1×10^5个/孔，使用前用预冷的PBS清洗三次。
吸附前抑制实验：
病毒和抗体在感染细胞前进行结合。吸附后抑制实验：
病毒先感染细胞，再加入抗体。
通过噬斑数的数目变化进行判断。