肿瘤免疫治疗读文献笔记

黄帮主

CAR-T治疗的两个技术关键点：

① T细胞培养体系的建立；

② T细胞转染效率；

CAR-T细胞技术的步骤：

① 采用血浆分离置换法提取收集患者体内白细胞，分离出T细胞。

② 给 T 细胞加入能识别肿瘤的分子，，普通 T 细胞变身为CAR-T 细胞。

③ 体外培养，大量扩增。

④ 把扩增好的 CAR-T 细胞输回患者体内。

⑤  严密监护患者，观察有无副作用。

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CAR-T细胞基本组成元件如图，大概分为五部分
① 抗原识别区：通过抗原识别结构域（ARD）和肿瘤细胞上的靶抗原进行结合。ARD可以为ScFv，纳米抗体，受体-配体，TCR-m，VLR等。
② 铰链区：这个区域给与ARD一定范围的活动，促进和抗原结合，同时也可形成免疫突触。目前常用的铰链区主要是IgG1,IgG4的Fc段，CD84，CD28，IgD和CD7等。③ 跨膜区：连接CAR的细胞内和细胞外成分，不同的跨膜区对CAR的表达和稳定性有影响。不直接参与信号传递，但是通过相互作用可以提高下游信号传递。
④ 胞内共刺激分子：CD28+41BB的组合使用频率最高。
⑤ 胞内T细胞活化分子：胞内信号分子主要来源于CD3，FcR-r。

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CAR-T进化史

第一代：由引导肽，抗原识别区，铰链区，跨膜结构域，和胞内T细胞活化分子四部分组成。
第二代：增加了一个胞内共刺激因子CD28或者CD137。
第三代：将二代的胞内共刺激因子进行串联表达
第四代：在二/三代的基础上，串联细胞因子IL-12，可调控的CAR基因等。

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TCR是T细胞表面的特异性受体，是一个多亚基的跨膜复合物，能调节抗原特异性的T细胞激活。与CD3结合形成TCR-CD3复合物，通过识别并结合MHC呈递的抗原从而激活T细胞，促进T细胞的分裂与分化。
TCR-T（TCR疗法的简称）的作用机制是向普通T细胞中引入新的基因，使得改造过的T细胞能够表达有效识别肿瘤细胞的TCR，从而引导T细胞杀死肿瘤细胞。

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CAR-T和TCR-T之间的区别：

TCR-T技术是将能够特异性与抗原结合的TCR基因转入T淋巴细胞，使其获得与表达该抗原肿瘤细胞结合并诱发T细胞杀伤肿瘤细胞的新的免疫细胞治疗模式。TCR-T细胞对表达目的抗原的靶细胞具有强大攻击能力，但是受MHC限制。CAR-T技术的使用比TCR-T有些优势，可以识别独立于MHC的表达，克服肿瘤免疫逃避的现象。

CAR-T细胞通过抗原-抗体的特异性结合来识别肿瘤细胞，不依赖于MHC抗原递呈的方式，因此可以克服肿瘤细胞因下调MHC和减少共刺激分子表达等所导致的肿瘤免疫逃逸。

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CAR-T细胞治疗时肿瘤抗原靶点的选择：
肿瘤细胞表面的蛋白质类和脂类抗原等，都可以作为CAR结合的靶点。
最理想的CAR结合肿瘤抗原靶点：
应该是只在肿瘤细胞中表达，在正常组织中不表达，且位于肿瘤细胞的表面。

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① 差异表达的TAAs：
在肿瘤组织中高表达，正常组织中低表达，如α-AFP，CEA，HER-2等
② 在肿瘤和非重要组织中表达的TAAs：
这类靶点的CAR-T细胞，可能会对同时表达这些抗原的正常组织产生杀伤作用，引起免疫抑制功能异常，如CD19，甲状腺球蛋白，NKG2D蛋白等等。
③ 在肿瘤组织中特异性表达，在正常组织中不表达的TAAs
这类靶点最为理想
④ 与肿瘤基质成分相关的TAAs
参与血管生成，基质重塑，成纤维细胞激活的分子，在正常组织中低表达，因此具有较低的细胞毒性杀伤作用。

黄帮主

基因转染T细胞的方法：实现基因的高效整合，表达在T细胞表面。
① 病毒转染的方法：
γ-反转录病毒载体，慢病毒载体，腺病毒相关病毒载体
体内试验结果证明，用病毒载体将CAR基因导入T细胞中制备CAR-T细胞，是安全有效的方法。目前最为常用的还是病毒转染，尤其是慢病毒载体。
② 非病毒转染的方法：
质粒DNA依赖的载体，转座子依赖的基因转染，mRNA介导的基因转导。

黄帮主

实现CAR-T产品的标准化，做到药效和风险可控是首要任务。
细胞免疫治疗的规范化、专业化、和标准化
一方面需要国家层面制定行业标准
一方面需要企业加强行业自律。

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