胶体金免疫层析试纸快速检测技术

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NC膜影响检测灵敏度，检测时间，特异性和固定化吸附的稳定性。NC膜对蛋白的结合能力，活性的保持及生产成本等方面较其他膜类都有较大的优势。
膜孔径大小和膜结合蛋白能力密切相关：
膜孔径越大，反应速度越快，显色越均匀，但是其蛋白的结合能力也越低，灵敏度和显色强度越低。
蛋白的包被量要相对饱和，包被后一定要充分干燥，37℃，相对湿度40%以下，干燥一天。

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柠檬酸三钠-鞣酸混合还原法
① 取4ml 1%柠檬酸三钠
② 加0.5ml 1%鞣酸（容量决定胶体金颗粒大小）
③ 加0.5ml 25mM 碳酸钾
④ 补水至终体积为20ml。
加热至60℃。
⑤ 取1ml 1%的HAucl4，加入79ml水中。
⑥ 加热至60℃，加入上述④液体20ml。
⑦ 保持这个温度，待溶液变成深红色。（约0.5-1小时）
⑧ 加热至沸腾，保持沸腾约5min。
胶体金溶液有很高的动力学稳定性，很难凝聚，数年稳定，少量的电解质可以作为稳定剂，但是浓度不宜过高。
某些高分子物质亦可以稳定：如蛋白质，葡萄糖，或者PEG20000.

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玻璃器皿的清洁：

影响胶体金质量及其稳定性的几种因素：制备过程中器具若全部使用干净的玻璃器皿，溶液一律用0.2μM滤膜过滤后使用，水用玻璃三蒸水，推荐使用超纯水，采取这些措施后制得的胶体金很稳定，不需使用硅化玻璃器皿也可直接制备高质量高稳定性的胶体金。

方案1：

流水冲洗；清洁液浸泡24h；自来水洗净清洁液；洗洁剂洗3～4次；自来水冲洗；蒸馏水洗3～4次；双蒸水把每个器皿洗3～4次；烤箱干燥后备用。

方案2：

流水冲洗干净，王水浸泡72h；取出后用大量自来水冲洗，洗洁精洗涤干净，蒸馏水浸泡24h，纯水冲洗2-3次，烤箱烘干备用。

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约登指数（Youden's index）=敏感性＋特异性-1

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胶体金表面水化层：
胶体金表面的水化层对于胶体金的稳定性至关重要，在进行标记时如果被破坏，容易形成胶体金聚集，造成死金。

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常用的封闭剂：
采用惰性分子，常用的有BSA，Casein，PEG等，不同的封闭剂，有不同的封闭效果。
如果加入BSA后，胶体金变黑或者发紫，最大可能的原因时BSA没有脱盐，或者含有重金属。
Casein可以降低反应性，一定程度上消除假阳性。
灵敏度差，可以增加PEG与其他封闭剂复配封闭。

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免疫层析技术方案的核心：
高度完善的膜反应体系，可提供实现液体样品平行移动及完成免疫亲和层析的特异反应所需的各种条件。
使用高分子纤维膜作为固相载体，该膜具有很强的蛋白吸附功能，抗体可以包被于膜上并经干燥处理后即作为固相。
液相为相应抗原-胶体金标记抗体复合物，可以和固相快速结合；

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仪器：
单维平面划膜喷金仪HM3010  上海金标
自动斩切机ZQ2000  上海金标

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06022：
NC膜的预处理：
① 用去离子水浸泡过夜；
② 用镊子小心取出，37℃，30min晾干，以pH=9.6的碳酸盐缓冲液浸泡30min，晾干待用。