一株乙型肝炎病毒鼠单抗的人源化及生物学活性鉴定

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序列比对：
5株人源化抗体和在FR的氨基酸差别所示，其中有７个位点的氨基酸全部保留为鼠单抗的氨基酸，说明这些氨基酸对保持CDR的正确构象非常重要。

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129G1人源化抗体与HBsAg抗原的结合活性检测
将５株人源化抗体和人鼠嵌合抗体的基因克隆至真核表达载体中，瞬间转染至Flp In CHO细胞表达并都能纯化出完整Ig G抗体。

通过化学发光法检测129G1人源化抗体与HBsAg的结合活性，结果显示这5株人源化抗体与HBsAg抗原均有结合活性，从曲线拟合计算出半数最大效应浓度，5 株抗体的EC50在0.78-5.02ug/ml之间，其中129G1-45的结合活性最好。
评价129G1人源化抗体在体外介导THP-1细胞的吞噬实验，将纯化后的抗体从起始浓度32ug/ml开始进行２倍梯度稀释，共稀释12个梯度．结果这些人源化抗体均能在体外介导THP-1细胞进行吞噬作用，嵌合抗体介导的吞噬率达50%时，使用的抗体质量浓度约为1.92ug/ml，人源化抗体129G1-81和129G1-45介导的吞噬效率与嵌合抗体相当，当吞噬率达50％时需要的抗体质量浓度分别约为1.45与2.77ug/ml。

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129G1人源化抗体在HBV转基因小鼠中的实验
通过HBV转基因小鼠评价129G1人源化抗体在动物体内的病毒清除能力，从而间接反映人源化抗体作为治疗药物的潜力。
５株与抗原结合能力强弱不同的人源化抗体与嵌合抗体以10mg/KG的剂量用单剂量尾静脉注射到HBV转基因小鼠体内，每天采集小鼠血清样品，对血清中DNA 和HBsAg水平进行检测，５株人源化抗体注射HBV 转基因小鼠体内后，小鼠血清中的DNA及HBsAg水平均有不同程度的下降，说明这些人源化抗体在动物体内具有清除病毒、抑制病毒扩增的生物学活性。
其中129G1-81这株与抗原结合活性较好的抗体，在动物体内也表现出最好的治疗效果，单剂量注射能有效抑制HBV和HBsAg达3d。与抗原结合实验结果、细胞吞噬实验结果基本呈正相关，129G1-81这株人源化抗体在小鼠体内表现出了良好的有效抑制小鼠血清中DNA及HBsAg水平的能力。

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讨论摘要：
新批准的治疗性抗体药物多以人源化抗体及全人源抗体为主，这是治疗性抗体药物发展的趋势。
大量的临床实验证明鼠源单克隆抗体具有比较高的免疫原性，因此在临床试验中屡受失败．为了减轻人抗鼠抗体免疫排斥反应，动物源单克隆抗体药物应用于人体前必须要进行人源化改造，同时也可以更加有效地激活人体免疫系统，降低抗体类药物的清除速度，并延长半衰期。

单纯的CDR移植很难完全达到亲本鼠抗的特异性及亲和力，因为FR的某些氨基酸是维持抗体CDR同抗原结合所不可替代的，对CDR移植后的抗体FR氨基酸进行回复突变，通过噬菌体抗体库的技术进行筛选，能得到亲和力较高的特异性抗体的多样性集合，有利于后续生物活性的分析。

本研究主要从三方面评价改造后的129G1人源化抗体的生物学活性，即与抗原的反应性、在体外介导的THP-1细胞吞噬作用以及在小鼠体内的病毒清除能力。
综合３项评估的结果，129G1-81这株抗体表现最优。

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这篇文章的技术路线和下图描述的一致