ELISA整理资料

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间接法测抗体的标准流程
基本原理：
将特异性抗原包被在固相载体上，形成固相抗原，加入待检标本（含相应抗体），其中抗体与固相抗原形成抗原-抗体复合物，再加入酶标记的二抗，与上述抗原-抗体复合物结合。此时加入底物，复合物上的酶则催化底物而显色。


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间接法测抗体

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竞争结合ELISA:Competition binding analysis
检测抗体用生物素标记 Z-Link™ Sulfo-NHS-Biotin (Thermo Scientific, 21217)
ELISA板加入1 μg/mL TT ，4℃包被过夜。用加入 2% BSA的PBST进行封闭。
检测抗体浓度调整到1 μg/mL，封闭抗体浓度终浓度为100 μg/mL 。
两种抗体加到同一个孔中，37℃孵育1个小时。
清洗后，加入HRP标记的链霉素，37℃孵育1小时。
清洗后，加入TMB底物液。
测OD值，计算检测抗体+封闭抗体孔的值/检测抗体孔的比值，比值小于30%，认为有竞争活性。如果比值大于>70，认为没有竞争活性。如果介于30-70之间，认为是有部分竞争活性。

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试剂的稳定性检测：

加速破坏实验

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最佳线性范围及定量限量验证：
通过直线型和定量限量的测定，确定测试范围及灵敏度。
找出最佳线性范围以确定最终可准确定量的参比品线性范围。