0009 M13噬菌体相关信息整理

hao9116073

黄总早上好，请问噬菌体对75%乙醇敏感吗，我看一般推荐1%次氯酸钠消灭，但是实验室一般75%乙醇消毒用的比较多，马上要开始实验了，实验员需要提高防护等级吗，毕竟人体内还是有大肠杆菌的，心里各种忐忑

黄帮主

hao9116073

黄帮主 发表于 2023-3-7 11:56

好的谢谢

黄帮主

噬菌体展示技术：
将靶基因融合到噬菌体衣壳蛋白基因中，得到的噬菌体颗粒包含了融合后的基因，同时在噬菌体上展示该基因编码的多肽和蛋白质，从而实现了表型和基因型的直接关联。
该技术已经成为一种发现新特性多肽以及改变已有多肽性质的强大工具。

黄帮主

噬菌体展示系统：

以丝状噬菌体为载体，将外源蛋白或多肽基因表达产物与外壳蛋白进行融合，使得外源蛋白或多肽在其表面得以展示，进而通过筛选获得表达有特异性蛋白质或多肽的噬菌体，再进行富集。
其优点是直接将基因型和表型联系到一起，再利用其与配体的特异性亲和力，将目的蛋白质或多肽筛选出来。

黄帮主

1985年，Smith首次将编码多肽序列的外源DNA片段插入丝状噬菌体f1的基因Ⅲ中，产生融合蛋白并在噬菌体表面展示，最终快速发现了与靶标特异性结合富集的多肽序列。噬菌体展示技术就此诞生。
常用的丝状噬菌体主要有M13，Fd，Fe等。

黄帮主

通过对噬菌体衣壳蛋白基因III进行部分缺失，引入琥珀型突变，构建新型辅助噬菌体或者噬菌粒。
不仅有效避免辅助噬菌体的污染问题，还可以使抗体展示效率提高5-20倍。
通过增加单价抗体展示在每个噬菌体表面，使抗原结合能力提高400倍。

黄帮主

pII蛋白：位于细菌胞质中，和双链DNA的IG区域进行结合，在正链产生缺刻，被宿主蛋白起始复制；
pX蛋白：感染后期开启单链DNA富集活动；
pV蛋白：位于细菌胞质中，为单链DNA结合蛋白；
pIII和pVI蛋白：位于噬菌体的末端，参与噬菌体的感染和释放，调节装配终止；
pIV蛋白：位于细菌外膜，编码噬菌体离开细菌时的多聚体外膜通道蛋白；
pI：位于细菌内膜，参与噬菌体的装配。

黄帮主

Ff丝状噬菌体只能感染带有F纤毛的细菌，如TG1，噬菌体感染起始于pIII蛋白N2结构域和大肠杆菌F纤毛的相互作用。
每个细菌只有几根纤毛，且受实验条件影响，如纤毛表达水平下降，或者低温下F纤毛不组装，有的细菌甚至没有纤毛。我们在实验过程中，如果要提高噬菌体的感染能力，可以通过提高细菌密度和噬菌体滴度来实现，但是同时又要防止细菌浓度过高，不能超过对数生长期，37℃比较合适噬菌体感染细菌，所有实验操作尽量在37℃环境下完成。

黄帮主

IG区序列：
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