猪圆环病毒2型体外滚环复制方法的建立

米小圈

猪圆环病毒2型体外滚环复制方法的建立

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我读这篇文章，是为了学习里面提到的滚环复制技术，整理出相应的protocol。
摘要：
目的：通过建立猪圆环病毒2型(PCV-2)体外滚环复制(RCA)方法，为PCV一2体外检测探寻更为简便易行的路径。
方法：将西北农林科技大学预防实验室保存分离纯化的PCV一2病料以传统PCR方法扩增出全基因组片段，然后在没有PCR扩增仪的情况下，只用简单的恒温装置，摸索RCA扩增条件，建立体外扩增PCV一2全基因组的方法。
结果：将2种方法扩增的全基因组片段进行测序，对其相似性进行比对。结果表明，以传统的PCR方法和RCA方法均扩增出1767 bp大小的片段，测序发现两者相似度达到99.9% 。
结论：成功建立了PCV一2体外滚环复制方法，扩增出病毒的全基因组片段。

米小圈

猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)为圆环病毒科圆环病毒属的成员，直径17 nm，为无囊膜的单股环状DNA病毒，采用滚环方式进行复制。
PK-15细胞目前被认为是PCV 生长的最佳细胞株，且不产生细胞病变。
该病毒威胁着猪群的健康，给养猪业带来巨大的经济损失。
快速检测出该病毒和分型很有必要。
phi29 DNA 聚合酶具有较高连续合成能力以及链置换的DNA聚合酶，有3‘-5 '外切酶(校正)活性，特殊的链置换和连续合成特性，并且在恒温条件下具有高保真复制的特性。
本试验基于猪圆环病毒的滚环复制特性以及phi29DNA聚合酶的对应功能，建立猪圆环病毒体外滚环复制的方法。

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P1：5-CAAGCTTGCTAGATCTCAGGGACAACGGAGTGAC-3(下划线为酶切位点 Hind III)；

P2：5-CCTCGAGGGAGCTCCACACTCAATCAGTAAGTTGC-3（下划线为酶切位点Xho I)。

P3：5-GTGGTCTACATTTCCAGCAGTT-3

P4：5-GCTCAAACCCCCGCTC-3 。