Kunjin virus replicons: an RNA-based, noncytopathic viral vector system for p...

傲慢与偏见

Kunjin virus replicons: an RNA-based, noncytopathic viral vector system for protein production, vaccine and gene therapy applications

傲慢与偏见

摘要：待整理，待整理

傲慢与偏见

近几十年来，成功开发了一些在哺乳动物细胞中表达异质蛋白的病毒载体系统，能有效在体内递送遗传物质。
DNA病毒中有：腺病毒，腺相关病毒，poxviruses痘病毒，herpes viruses疱疹病毒。负链RNA病毒中有： vesicular stomatitis virus水疱性口炎病毒, rabies virus 狂犬病毒，Sendai virus仙台病毒，measles virus麻疹病毒。
阳性RNA病毒中有： retroviruses反转录病毒，alphaviruses甲病毒 ，poliovirus脊髓灰质炎病毒 , pestiviruses瘟病毒，coronaviruses冠状病毒，flaviviruses黄热病毒。
病毒载体的开发主要用于疫苗研究，基因治疗，蛋白生产等等。

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开发病毒载体时常常遇见的问题：
▲低表达/瞬时基因表达
▲对骨架载体产生免疫
▲能整合到宿主基因组中，如逆转录病毒或者一些DNA病毒，可能会激活癌基因。
▲可能因为基因重组而重新生成感染性病毒颗粒。

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KUNjin病毒见于澳大利亚北部和巴布新几内亚，与西尼罗病毒同属一个血清亚型，曾经用于开发WNV活病毒疫苗。
和WN相比较，kunjin毒性要弱，感染后基本无症状，偶尔会引起轻微的脑炎。
昆津病毒的基因组为11 022 nt ，单股正链RNA，含有一个单一开放读码框，编码3 个结构蛋白 (C、prM/M 和E) 和7个非结构蛋白 (NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B 和NS5)，5′端和3′端为非编码区 (Untranslated region，UTR)。
结构蛋白参与病毒的组装，非结构蛋白和两端的UTRs 共同参与病毒的复制翻译过程。

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1996 年，在昆津病毒感染性全长cDNA 克隆的基础上构建复制子载体，保留C 蛋白氨基端的前20个氨基酸 (C20) 的编码序列以及E 蛋白羧基末端22 个氨基酸序列（确保NS1能正确定位到ER腔）。

KUN复制子载体携带的HG基因插入C20和E22之间，和KUN的多肽蛋白一起表达，通常将小鼠泛素基因和FMDV-2分别添加于HG异质基因的两侧，确保能释放出HG蛋白产物。IRES-NEO基因插入到KUN复制子载体的3’ UTR区，筛选能稳定表达KUN非结构蛋白的细胞系。
在C20和2A之间插入PAC基因，用嘌呤霉素进行筛选，得到稳转细胞系。

which is recognised and cleaved at C-terminus by a cellular
ubiquitin-specific protease complex [40]. The presence of either
of these sequences at the N-terminal end of HGs results in
release of HG products with nearly authentic N-termini. The
presence of the FMDV-2A autoprotease site at the C-terminus
of the HG results in the release of a HG product, which retains
the FMDV-2A autoprotease sequence at the C-terminus. To
generate HG products with authentic C-termini, the HGs
with authentic translation termination codons can be cloned
into the KUN vector containing an internal ribosome entry
site of encephalomyocarditis virus, which directs independent
translation of the downstream KUN NS coding region
(Figure 1). KUN vectors can also express antibiotic resistance
genes, such as neomycin phosphotransferase II (neo) or
puromycin N-acetyltransferase (pac), which allow selection of
cell lines stably expressing replicon RNA and HGs [16,41,42].

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黄热病毒属的WN，YF，DEN，和TBE病毒，KUNjin病毒用于复制子载体的改造。
黄热病毒的复制子特点是非结构蛋白能使NS蛋白和HG基因进行复制， RNA高效复制，确保HG高效表达。
RNA复制通常在胞浆中进行，因此避免了整合到细胞基因组上。
甲病毒复制系统用于制备HIV疫苗/癌症疫苗，已经进入I期临床实验。
甲病毒和黄热病毒复制子系统的区别在于后者没有细胞病变，KUN复制子载体系统可能会成为有用的载体表达系统。

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kun复制子系统包括：
RNA-based复制子，由体外转录产物RNA直接转染细胞。
DNA-based复制子，受CMV控制，以DNA形式转染细胞，在细胞内进行转录。