Gibson组装/Golden Gate

黄帮主

Gibson组装非常适合用于拼接多个线性DNA片段，也适合将目的DNA插入载体中。实验分为两步：
① 制备末端加有同源序列的线性DNA片段；
② 将这些DNA片段和试剂盒中的master mix（含有三种酶）混合孵育。
组装后产物无需纯化，可以直接转化感受态细胞获得目的质粒。

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实验操作流程详见附件
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Golden gate 的方法可以实现片段的边切边连,节省时间，同时可以连个多个片段的连接。
原理：
golden gate一般用的是3类酶，一般以bsmb 1，Bsa1, Bbs1这三种酶，识别特定的序列，并在特定序列以后隔几个任意的碱基切开。
连接酶用T7，在连接的时候可以把片段跟切好的载体混到一种特殊的buffer里。
在这里内切酶跟T7都可以保持比较高的活性，通过温度的调节，实现克隆的构建。