human anti-plague monoclonal antibodies protect mice from Yersinia pestis in ...

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Human anti-plague monoclonal antibodies protect mice from Yersinia pestis in a bubonic plague model
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我们通过用F、V抗原筛选一个天然的全人源噬菌体展示的 Fab 库，筛选到一个抗 F1 特异性人源mAb （m252） 和两个抗 V 特异性人源化mAb （m253， m254）。M252 比 m253 和 m254 在小鼠鼠疫模型中表现出更好的保护效果，可以抵御 鼠疫菌的攻击。当三个抗体联合使用时，具有协同效应。在攻击后的不同时间给予 m252 时，实现了不完全的保护。

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单独使用时，m252 显示出良好的保护效果，而 m253 和 m254 则没有。然而，当它们一起使用时，发现了明显的协同效应。仅 m252 就能通过改变抗体注入时间来实现最大保护。

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经过四轮筛选，挑选阳性克隆，序列分析显示，m252 具有重链和轻链分别源自IGHV1-2*02 和 IGKV1-16*01。M253 起源于 IGHV1-18*01 和 IGKV1-9*01，而 m254 则来自 IGHV3-43*01 和 IGKV1-27*01。

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抗体的表达

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人源抗 F1 和抗 V Fabs 和鼠源抗 F1 和抗 V mabs 之间的竞争水平较低，V m253和m254 Fab抗体之间也缺乏竞争，这表明这两种人源抗VFabs识别V-抗原上不同的表位

鼠源抗F1单抗：F1-04-A-G1
鼠源抗V单抗：Mab 7.3

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人源抗F1 IgG1 mAb（m252）与鼠疫菌结合的免疫荧光检测

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人源抗F1（m252）和抗Vmab（m253.m254）在腺鼠疫模型中一起使用时表现出协同保护。
人源和鼠源抗F1和抗V mAbs在攻毒Y.CO92株之前24小时被动免疫小鼠，并在攻毒后监测21天每个治疗组的幸存小鼠数量。上午 5 点使用了以下抗体和量：正常鼠血清（NMS，500微克）：鼠标抗F1（F1m，500ug）;鼠疫抗 V （7.3 mab， 100 μg）;人源抗F1（m252，500ug）;人源抗V（m253和m254，每个500ug）。
NMS， 500 μg;F1m， 500 μg;m252， 500 μg;m253+ m254， 每个 500 μg;m252+ m253+ m254， 每个 500 μg。

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非特异性人类IgG1抗体（Hu-IgG1）对平均死亡时间（MTD）和被动免疫人源抗F1 mAb的幸存小鼠数量影响甚微。
非特异性人类IgG1抗体（Hu-IgG1）+鼠源单抗 F1m
非特异性人类IgG1抗体（Hu-IgG1）+人源单抗 m252

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半衰期：
500ug每只，尾静脉注射。每组3-4只小鼠，取平均值、
抗F1 m252 mAb的半衰时间似乎约为8天，而m253 mAb的半衰寿命约为10天。21天后，这两种人类抗体的水平无法检测到。相比之下，小鼠抗F1（F1m）和抗V（7.3米）mAbs的水平最初可能像人类抗鼠疫的mAbs一样下降，但21天后，水平仍约为初始浓度的40%至50%

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人源F1 m252 mAb的在攻毒后再注射赋予了更好的保护。
人源抗F1 m252 mAb是在鼠疫菌攻毒前或攻毒后施用的。小鼠在攻毒后被监测21天。
V 7.3m mAb （100 μg） 作为阳性对照。正常人类血清（NHS，500微克），作为阴性对照，每组只有5只小鼠。每个抗体背后的数字表示与攻毒日（第 0 天）相比，在给小鼠施用抗体的天数（500 μg）中的时间。
人源抗F1 m252（+1和+5）之后的两个数字表示两个不同的日子，即mAb（500微克）被添加到同一组小鼠相对于攻毒日。