内含子在人凝血因子反转录病毒载体中的表达及剪接作用

傲慢与偏见

内含子在人凝血因子在反转录病毒载体中的表达及剪接作用

傲慢与偏见

摘要 构 建 了带有 内含 子 的反 转 录病 毒 表 达 载 体 , 研 究 内含 子对 的表 达 影 响 。 反 转 录病
毒 载 体 经 过 细 胞 包 装后 , 稳 定 保 留 内含 子 是 进 一 步研 究 内含 子 对 表 达影 响 的关
键 首 先 构 建 了 一 、 ‘ 一 表 达 元 件 正 向 插 人 的 反 转 录 病 毒 载 体 。 其 中 ,
一 带有 源 于 刀 的异 源 内含 子 , ‘ 一 带有 来 自 自身 的第 一 内含 子 , 其
中间部分 顺序缺 失 , 只 包括 剪接供体 和 剪接 受 体位 点 。 用 方法 发现 , 反 转 录 病 毒介 导
基 因 转移 的载体 中 的 内含 子 都 被 剪切 掉 。 为避免 内含 子 的 剪 切 , 又 构 建 了 表 达 元 件反 向插 人
的反 转 录病 毒 载 体 ‘ 一 、 ‘ 。 用 同样 的方 法 证 明 , 反 向插 入 载 体 中
的 内含 被 保 留 下来 。 证 明 表 达 元件反 向插 人 的反 转 录 病 毒载体可 以 得到 稳定 的含 有 内含 子
的 表 达 载 休 , 检 测 证 明 内含 子 能提 高 表 达 。 为进 一步 提 高 月 在 体外 细 胞 和 体 内
的表 达 水 平提 供依 据 。

傲慢与偏见

血友病的基因治疗中，hFIX的表达水平对治疗效果有着至关重要的影响。有发现内含子对基因表达起重要调控作用。
特别是在活体水平上，内含子是表达元件的必要调控因子。