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常用质粒载体中-复制子,启动子序列

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发表于 2023-11-1 19:29:22 | 显示全部楼层 |阅读模式
本帖最后由 黄帮主 于 2023-11-2 09:07 编辑

载体复制子,启动子序列:
T3启动子:3楼
T7启动子:4楼
SP6启动子:5楼
SV40启动子:6楼
F1 ori:7楼
pUC ori: 8楼

CMV启动子:9楼
COLE1复制原点序列:10楼
pBR322复制原点序列:11楼
U6启动子:12楼
pBAD启动子:13楼
plac:14楼
tac:15楼
AraC乳糖操纵子:29楼
SV40 polyA:21楼
SV40 终止子序列:22楼
SV40 ori:28楼


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 楼主| 发表于 2023-11-1 19:37:27 | 显示全部楼层
本帖最后由 黄帮主 于 2023-11-1 22:45 编辑

复制子(replicon)
复制子由起始复制原点(ORI)及其调控元件组成,和质粒的拷贝数密切相关。
ORI是DNA复制起始的位点,ORI序列通常富含腺嘌呤(A)和胸腺嘧啶(T),A-T碱基对是由两个氢键连接,而C-G是由三个氢键连接,因此,富含A-T的DNA序列更易解链,解链的ORI区域给复制机器提供了结合的空间从而起始质粒复制。
ORI 的数量众多,常见的复制子有ColE1,pMB1,pSC101,R6K和15A,复制起点的不同可能导致质粒拷贝数的不同。
复制起点的控制可分为松弛型(relaxed)和严紧型(stringent)两种。
粒的拷贝数与正调控与负调控的相对强度相关,也可通过对复制子进行突变而改变。
如,pMB1复制子可维持细胞中含有大约20个质粒拷贝,而仅突变了两处得到的pUC却能在每个细胞中产生多达700个质粒拷贝。



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 楼主| 发表于 2023-11-1 19:46:51 | 显示全部楼层
本帖最后由 黄帮主 于 2023-11-1 19:50 编辑

T3启动子:
AATTAACCCTCACTAAAGGG
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 楼主| 发表于 2023-11-1 19:48:05 | 显示全部楼层
本帖最后由 黄帮主 于 2023-11-1 19:56 编辑

T7 启动子序列:
GTAATACGACTCACTATAGGGC
T7启动子是来自于T7噬菌体的能对T7 RNA聚合酶有特异性反应的强启动子。
T7 RNA聚合酶能选择性激活T7噬菌体启动子的转录,其合成mRNA的速度比普通大肠杆菌的RNA聚合酶快5倍左右。
当二者同时存在时,宿主本身基因的转录竞争不过T7表达系统,几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白,诱导表达后仅仅几个小时,目的蛋白即能占细胞总蛋白的50%以上。



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 楼主| 发表于 2023-11-1 19:48:15 | 显示全部楼层
本帖最后由 黄帮主 于 2023-11-1 22:46 编辑

SP6启动子序列:
ATTTAGGTGACACTATAG

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 楼主| 发表于 2023-11-1 20:07:10 | 显示全部楼层
SV40复制子:
其中红色区域为ori复制起点
CTGTGGAATGTGTGTCAGTTAGGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCAGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAA








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 楼主| 发表于 2023-11-1 20:08:40 | 显示全部楼层
本帖最后由 黄帮主 于 2023-11-1 22:46 编辑

F1启动子(f1 ori):噬菌体基因组DNA的复制区序列(一段DNA序列),可引导单链DNA复制。
序列为:
acgcgccctgtagcggcgcattaagcgcggcgggtgtggtggttacgcgcagcgtgaccgctacacttgccagcgccctagcgcccgctcctttcgctttcttcccttcctttctcgccacgttcgccggctttccccgtcaagctctaaatcgggggctccctttagggttccgatttagtgctttacggcacctcgaccccaaaaaacttgatttgggtgatggttcacgtagtgggccatcgccctgatagacggtttttcgccctttgacgttggagtccacgttctttaatagtggactcttgttccaaactggaacaacactcaaccctatctcgggctattcttttgatttataagggattttgccgatttcggcctattggttaaaaaatgagctgatttaacaaaaatttaacgcgaatt

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 楼主| 发表于 2023-11-1 22:24:21 | 显示全部楼层
pUC origin
GTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCTATGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCA
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 楼主| 发表于 2023-11-1 22:26:28 | 显示全部楼层
本帖最后由 黄帮主 于 2023-11-1 22:39 编辑

CMV启动子:602bp
其中红色部分为CAG enhancer
ATGCATTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTCAGATCCGCTAGC


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 楼主| 发表于 2023-11-1 22:27:11 | 显示全部楼层
本帖最后由 黄帮主 于 2023-11-1 22:40 编辑

ColE1 复制原点区域:
aaaggatcttcttgagatcctttttttctgcgcgtaatctgctgcttgcaaacaaaaaaaccaccgctaccagcggtggtttgtttgccggatcaagagctaccaactctttttccgaaggtaactggcttcagcagagcgcagataccaaatactgttcttctagtgtagccgtagttaggccaccacttcaagaactctgtagcaccgcctacatacctcgctctgctaatcctgttaccagtggctgctgccagtggcgataagtcgtgtcttaccgggttggactcaagacgatagttaccggataaggcgcagcggtcgggctgaacggggggttcgtgcacacagcccagcttggagcgaacgacctacaccgaactgagatacctacagcgtgagctatgagaaagcgccacgcttcccgaagggagaaaggcggacaggtatccggtaagcggcagggtcggaacaggagagcgcacgagggagcttccagggggaaacgcctggtatctttatagtcctgtcgggtttcgccacctctgacttgagcgtcgatttttgtgatgctcgtcaggggggcggagcctatggaaaaacgccagcaacgcg
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