噬菌体展示技术常用载体汇总

黄帮主

噬菌粒载体pMECS 4510bp
载体带Plac启动子-lac操纵子，抗体片段分子前有pelB分泌表达信号肽，抗体片段后面带有HA标签和His标签，M13噬菌体的gene III序列，此载体含有f1复制起始位点，Amp抗性。
载体序列：

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辅助噬菌体M13KO7 单链 DNA 8669
kana 抗性，来源于 M13 噬菌体，和 M13 噬菌体比较，有以下的特征：1. IG 区插入一个来源于 Tn903 转座子的 Kana 抗性基因，赋予了 M13KO7 卡那霉素抗性，能够进行选择性筛选；2. IG 区插入一个来源于 p15A 的质粒复制起始区，确保噬菌体在细菌中可以不依赖 pII 蛋白进行自我复制；3. pII 蛋白在第 40 位有一处氨基酸突变，Met40IIe，突变后的的 gII 产物将优先作用于细菌中噬菌粒载体上的复制起始区，导致噬菌粒的正链 DNA 多于辅助噬菌体自身产生的 DNA，因而保证细菌中噬菌粒的单链 DNA 占优势。序列如下：

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pHEN系列载体来源于pUC119载体
pHEN1载体：
① PCR扩增丝状噬菌体的gpIII全长基因，包含信号肽序列，插入到pUC119中；
② 用peLB信号肽序列替代上面gpIII的信号肽序列，并且引入HA标签，Not I/Sfi I酶切位点等。

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KM13辅助噬菌体:
在其次要外壳蛋白pIII的第二和第三结构域之间含有一个蛋白酶裂解位点，使得没有融合蛋白的噬菌体在生物筛选的胰蛋白酶洗脱步骤中不具有感染性。
KM13是一种流行的辅助噬菌体，允许使用胰蛋白酶进行洗脱（经验表明，首先使用TEA进行洗脱，然后使用胰蛋白酶处理）。
虽然这切割了显示的蛋白质，但遗传信息仍然包含在噬菌体中。一旦用洗脱的噬菌体感染细菌并进行扩增，蛋白质就会显示在扩增的噬菌体的外壳蛋白上，以便进行后续的筛选。