常用缓冲液的配制
本帖最后由 黄帮主 于 2022-6-22 20:09 编辑常用缓冲液配制，按英文字母排序：磷酸缓冲盐溶液（PBS） 9楼TBS缓冲液，用于WB 8楼TB缓冲液，用于蛋白表达，10楼
本帖最后由 黄帮主 于 2019-9-24 22:24 编辑
2 常用抗生素的配制
镁离子是四环素的拮抗剂，对于四环素为筛选抗性的细菌，应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）
以水为溶剂的抗生素储存液应用0.22um滤器过滤除菌。
以乙醇为溶剂的抗生素储存液无需除菌处理。
本帖最后由 黄帮主 于 2021-11-26 21:50 编辑
4 特殊培养基M9的配制
1L M9培养基的配制：750ml无菌去离子水中，加入5×M9盐溶液200ml，1M 硫酸镁 2ml，20ml 20%的葡萄糖，0.1M氯化钙1ml ，补水定容至1L。
5×M9盐溶液的配制：1L液体中，溶解35.5g磷酸氢二钠，15g磷酸二氢钾，2.5g氯化钠，5g氯化铵。溶解后分装，200ml/瓶，高压灭菌。M9平板的配制：去离子水240ml，加入4.5g琼脂粉，高压灭菌。灭菌后加入5×M9盐溶液60ml，1M 硫酸镁 2.1ml，12ml 20%的葡萄糖，0.1M氯化钙0.3ml，50×B1（维生素）6ml。50×维生素的配制：10mg维生素B1一共100片，碾碎后加入20ml水，充分溶解，3600rpm×5min，取上清，过滤除菌。
甲基纤维素：
母液：5%结晶紫溶液，结晶紫粉末25g溶于无水乙醇475ml中，过滤除渣。
紫色使用液：5%结晶紫溶液100ml，0.85%氯化钠37.5ml，40%甲醛溶液25ml。
本帖最后由 黄帮主 于 2022-7-14 10:00 编辑
磷酸缓冲液的配制：
首先配制0.2M的磷酸二氢钠以及0.2M的磷酸氢二钠溶液。
根据不同pH进行混合：
PB使用液，即0.02M的PB缓冲液，将上述母液稀释10倍，加入水进行稀释，对PH值影响不大。 本帖最后由 黄帮主 于 2021-12-5 23:18 编辑
WB的TBS缓冲液：主要是由去污剂和抑制剂组成，用于膜阻断和洗涤。
1M Tris.cl（PH=7.3) 10ml
5M Nacl20ml
储存液可放大十倍。配置成10×TBS
磷酸缓冲盐溶液（PBS）137mM Nacl2.7mM Kcl10mM Na2HPO42mM KH2PO4配制：用800ml蒸馏水溶解8gNacl，0.2g Kcl，1.44gNa2HPO4，0.24g KH2PO4。用Hcl调节溶液的pH，定容至1L，高压灭菌，或者过滤除菌，室温保存。该液体缺乏双价阳离子，需要时可以补加1mM 氯化钙和0.5mM氯化镁。
2. PBS储存液(10×PBS, pH 7.4)1.37M Nacl27mM Kcl100mM Na2HPO420mM KH2PO4配制：用800ml蒸馏水溶解80gNacl，2g Kcl，14.4gNa2HPO4，2.4g KH2PO4。用Hcl调节溶液的pH至7.4，定容至1L，高压灭菌，或者过滤除菌，室温保存。使用时稀释10倍，配置成为1×PBS。
模拟脑脊液的配制：
Uchida配方aSCF，氯化钠118mM，氯化钾（KCl）2.5 mM，硫酸镁（MgSO4）3 mM，磷酸二氢钠（NaH2PO4）1.1mM，碳酸氢钠（NaHCO3）26 mM,，氯化钙（CaCl2）1 mM 和葡萄糖 11 mM，混匀后储存于4℃冰箱。
本帖最后由 黄帮主 于 2022-6-22 20:14 编辑
TB（Terrific Broth）培养基TB培养基通常用于实验室规模的蛋白质表达和质粒提取。跟LB培养基相比，TB培养基中添加了磷酸盐。更多的胰蛋白胨和酵母提取物。还多了 0.4 % 的甘油作为额外的碳源。所有这些元素能够支持大肠杆菌在正常的摇瓶培养条件下生长到 OD=0.6--0.8