双特异性抗体

青龙偃月刀

研究初期，选取了5种抗c-MET的母本单抗（A，B，C，D，E），8种抗EGFR的母本单抗（A，B，C，D，E，F，G，H），经过组合得到40株抗EGFR/c-MET双抗。对这40株抗体进行层层筛选。

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① 结合实验：要求EC50＜1ug/ml。

② MET磷酸化：选取能抑制MET磷酸化的抗体。

❀ 弃去EC50>1ug/ml，不能抑制MET磷酸化的抗体。

③ 细胞增殖实验：能够有效抑制HGF-cMET/EGFP信号传导途径激发的细胞增殖。

❀ 弃去上述不能有效抑制细胞增殖的抗体。

④ EGFP磷酸化实验：

❀ 弃去EGFP磷酸化不能受到抑制的抗体。

最终MET B×EGFR H BsAb综合评分最高，即后来成药的Amivantamab。

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作用机制：
JNJ-6372的双抗结构使得两株不同靶点的抗体通过协同作用表现出更高的抗肿瘤水平。
抗体去岩藻糖的特性使抗体和FcrRIIIa结合更紧密，增强Fc介导的ADCC效应。
双抗能降低EGFR以及c-Met的表达量，细胞上的受体数量减少。
促进EGFR以及c-MET的内吞作用，并利用溶酶体将其降解。
双抗能抑制EGFR以及c-Met的磷酸化，抑制受体相关的下游信号通路的表达激活。
阻断信号通路激活并向下游传递信号，可抑制肿瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。
通过Fc受体介导ADCC，ADCR效应。
单核细胞和巨噬细胞的胞啃作用诱导的受体下调和抗肿瘤作用。

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  JNJ-61186372双抗的两臂中，EGFR结合臂来源于Zalutumumab的序列，识别表位位于EGFR功能区III。靶向c-MET的结合臂能阻断肝细胞生长因子(HBF)结合。Fc段来自一个针对无关抗原(HIV gp12)的人源化全抗。

    JNJ-61186372在对TKI敏感的EGFR突变型非小细胞肺癌模型的临床前活性检测和进行中的临床试验中展现出很好的抗肿瘤活性，疗效遍及各种EGFR突变型(EGFR C797S，T790M，ex20ins以及MET扩增)。

    尤其耀眼的结果是，JNJ-61186372对EGFR ex20ins有疗效。在Ba/F3细胞（EGFR有ex20ins突变）和患者来源细胞/类器官/异种移植动物模型中，通过有效下调EGFR/cMet水平和诱导细胞凋亡等作用抑制细胞增殖，发挥抗肿瘤作用。

    2019年ASCO年会上公布的数据显示，在I期临床实验中，27例存在EGFR ex20ins的NSCLC患者入组，其中20例可评估疗效，客观缓解率(ORR)达到30%，疾病控制率(DCR)达到100%。

    2020年ASCO年会上公布的数据，有50名EGFR ex20ins的NSCLC患者入组，29名患者既往曾接受含铂类药物化疗，在39名可评估疗效患者中的客观缓解率ORR达到36%，临床获益率为67%，中位无进展生存期mPFS=8.3m，29名既往接受含铂药物治疗患者客观缓解率ORR=41%，中位无进展生存期为mPFS=8.6m。

    2021.05.23 ，Rybrevant成为第一个获批用于EGFR ex20ins突变阳性的NSCLC的靶向疗法。此外，Rybrevant在多种EGFR突变疾病的患者中显示出治疗活性：EGFR C797S，T790M，ex20ins和MET扩增，相信很快该药获批的适应症会进一步得以扩增。