鼠疫耶尔森菌rV抗原单抗系统及其ELISA检测方法的建立

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3)试剂的配制及稳定性
根据单抗识别不同的抗原表位，选择一个单抗作为酶标记抗体 ，酶工作浓度为1:4000；
另一株单抗 (2g/mL)为捕获抗体组成最佳配对。
为预测试剂的稳定性，进行加速破坏试验 ，将试剂 37℃放置 7d与 4℃放置 30d的试剂同时进行测定 ，比较A值及相关系数 、内部质控品的变化。

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试剂的稳定性：试剂的稳定性较好

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4)试剂方法的验证
参照生物制品质量控制分析方法验证技术审评的一般原则
①专属性试验
②最佳线性范围及定量限量验证
③精密度试验

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双抗体夹心ELISA检测rV抗原标准曲线及检测灵敏度的确定：rV抗原质控品，经过 lowry法准确定氮后按10～100ng/mL做系列稀释 ，配制 rV抗原标准溶液通过 6次试验得出A值的平均值，在 Excel制作平滑曲线图，取其实验室质控品各个对应浓度的 A 平均值 ，制作曲线图，图 3中显示抗原含量在 2．5～10ng／mL为平台期 ，灵敏度最低检测值为 2．5ng／mL，40～100ng／mL为缓慢上行线 ，即在此范围内随 rV抗原含量 的增加 A 。 值增加不明显 ，而只有在 1O～40ng／mL时为斜线 型，见图4所示。选定在此范围内测定值构建成标准 曲线图，具有理想 的准确性 和重复性 ，r=0．997，变异系数 小于 15％

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III型分泌系统T3SS
是使哺乳动物或植物致病的多种革兰氏阴性细菌以及与植物或昆虫共生细菌中发现的一种毒力机制。
T3SS又被称为注射体，由针状注射器和效应蛋白组成，这些效应蛋白从细菌的胞质溶胶直接注射到目标宿主细胞中，以劈坏，劫持或模仿宿主的信号蛋白。
在病原菌不同的生命周期和感染过程，T3SS用于不同的功能，主要是来破坏宿主固有免疫反应，从而有利于病原菌的生存。

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鼠疫杆菌的六个效应蛋白，YopH，YopO，YopE，YopT，YopM，YopP。效应蛋白通过T3SS分泌到宿主细胞的细胞质，影响传导途径中关键的信号，包括吞噬作用，细胞因子的释放，和氧爆作用以破坏宿主细胞的防御系统。

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先天免疫系统是抵御病原体入侵宿主的第一道防线。
免疫细胞通过识别病原体的分子形式，并做出相对应反应以抵御感染。
促炎性细胞因子的分泌和活性氧的产生以及吞噬作用和诱导的程序性细胞死亡是先天性免疫细胞功能的体现，目的是与入侵的病原体作斗争。