IBRV牛传染性鼻气管炎的纳米抗体

青花瓷

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牛传染性鼻气管炎(IBR，infectious bovine rhinotracheitis）又称坏死性鼻炎或红鼻病， 由牛传染性鼻气管炎病毒IBRV引起。
IBR在世界范围内广泛流行， 由于病牛的潜伏感染及排毒， 导致该病很难清除， 危害巨大。
1BRV具有噬神经性，牛感染后IBRV会潜伏在其体内， 造成牛终身带毒，危害性严重，IBR是养牛业和世界贸易中重点检疫的传染病。
在应激因素刺激下反复感染,导致该病难以清除。
IBRV的 gD蛋白是存在于IBRV囊膜中的糖蛋白， 在以往研究中， gD蛋白与其他相关蛋白相比， 抗gD蛋白的抗体对IBRV的中和效果最好。

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表达了病毒gD蛋白：
1107bp
插入到原核表达载体pET-28a中，蛋白大小为55kDa。
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将IBRV（应该是灭活的吧？)与等体积弗氏完全佐剂混合，健康成年双峰驼皮下多点接种， 免疫周期间隔为10 d，加强免疫时使用弗氏不完全佐剂。
经4次免疫后， 采集双峰驼血清， 以IBRV为包被抗原、 HRP标记的兔抗驼IgG2抗体为二抗， 采用间接ELISA法检测抗体效价，效价达到1：4096。
采集全血200mL，扩增后的纳米抗体基因库序列与pCANTAB5E噬菌粒载体连接， 连接产物转化至E.coli TG1感受态细胞。
库容有7×10^7。

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用gD蛋白进行筛选。
经过三轮筛选，phage-ELISA进行鉴定，挑取的92个克隆中有14个克隆具有较高的抗原结合活性，其中1株结合活性最高的克隆进行下一步的表达，纯化和鉴定。

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纳米抗体基因插入到pET-25b-SBP（链霉亲合素结合肽标签，38个氨基酸序列）的质粒中，转化Transetta(DE3）中。
所以ELISA，WB时，用HRP-链霉亲和素作为二抗。
结合和预期一致。