布氏杆菌的纳米抗体

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Screening and identification of a human domain antibody against Brucella abortus VirB5

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布鲁氏菌病是由布鲁氏杆菌属引起的。布氏杆菌属于革兰氏阴性菌。
布病为人畜共患疾病，布氏杆菌感染牛、猪、绵羊、山羊等哺乳动物，包括人类。
动物布鲁氏菌病造成严重的经济损失并影响相关国际运输和贸易。人患布鲁氏菌病可引起多器官功能障碍的急性和慢性症状。
布氏菌IV型分泌系统(T4SS) VirB5位于细胞表面，作为一种靶向宿主细胞受体的特异性粘附蛋白。
是巨噬细胞感染所必需的，对小鼠产生毒性。
本研究分离并鉴定一种针对布鲁氏菌的特异性人结构域抗体从人单结构域抗体(sdAb或VHH)噬菌体显示库中提取VirB5。
经5轮筛选，一种名为BaV5VH4的sdAb在酶联免疫吸附试验(ELISA)中表现出最高的亲和力。
通过结合试验、斑点杂交和染色等方法验证了其与B. abortus VirB5的相互作用，分子对接。

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10004：光滑型布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备
传统的血清学诊断在家畜疫病诊断中往往出现假阳性问题，可直接导致巨大的经济损失。
假阳性的原因是由于布氏杆菌的 S-LPS 与其他一些革兰氏阴性菌表面的 LPS 的相似结构引起交叉反应。
光滑型(S)布鲁氏菌 LPS 的 O 链的化学结构是一种 4， 6- 双脱氧 -4 甲酰胺基 -α-D- 吡喃甘露糖残基的聚合物。
到目前为止，已经发现有 4 种类型的表位：
A 或者 M表位； S 型布鲁氏菌特有的 C 表位； S 型布鲁氏菌与小肠结肠炎耶尔森氏菌 O∶9 共有的 C/Y 表位。

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流产型布氏杆菌S-19、马尔他型布氏杆菌M5-90、猪型布氏杆菌 S2、小肠结肠炎耶尔森菌 O∶9。
沙门氏菌 045-2 (D 群)、C500(C1 群)、AE616 (B 群)及大肠杆菌 O∶157 为中国药品生物制品监察所提供。
实验动物：6周龄～8周龄以上 BALB/c 雌性小鼠，成年家兔 2 只。

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光滑型布鲁氏菌表面最主要的抗原就是 LPS，它的 O 链像人的“手臂”从菌细胞表面向外伸展，由于“LPS 和 O 链的空间位阻”作用，表面蛋白几乎不能刺激机体产生相应抗体。直接采用马尔他型布氏杆菌 M5-90 全菌抗原免疫小鼠，实验表明全菌体免疫完全达到了实验的要求。

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10005 NbBRUC02
布鲁氏杆菌是革兰氏阴性菌，在真核细胞中生存。
使用热灭活的布鲁氏菌Riv1免疫骆驼，产生高滴度的抗原特异性的重链抗体。
构建纳米抗体库，经过扩建筛选，得到三株抗体。
有望后续用于布鲁氏菌病的疫苗接种、诊断和治疗。

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布氏杆菌分为羊，牛，猪三种，主要寄生于巨噬细胞。
检测手段有：
传统血清学-检测到LPS的抗体，LPS是杆菌主要的表面抗原，需要和鼠疫杆菌进行区分，LPS的O：9表位在鼠疫杆菌中也存在。

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10005 使用材料：
B melitensis 菌株Riv.1 叙利亚用于牛免疫的疫苗
B abortus 菌株NalR 当地的一个流行株
① 布氏杆菌在布氏肉汤中进行培养，加5%热灭活马血清，37℃培养48小时
② 65℃ 热灭活30min；
③ 冷PBS进行清洗；
④ 重新接种菌种到培养皿上确保菌已经灭活。

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近20年来，我国的布病病例持续增加，1998年以后，人布鲁氏菌病疫情强势升高，发病人数逐年上升，2014年报告新发病例，发病率3 .14/10万，较上一年同期上升18 .91％。布病的主要流行区集中于我国的“三北”地区，即东北、华北和西北，以内蒙古、新疆、黑龙江、吉林等地疫情尤为严重。
根据布鲁氏菌的细菌学特征和感染宿主的亲嗜性，传统上将布鲁氏菌属分为6个种，即牛种布鲁氏菌、羊种布鲁氏菌、猪种布鲁氏菌、犬种布鲁氏菌、绵羊附睾种布鲁氏菌和沙林鼠种布鲁氏菌。