噬菌体展示技术及其在抗体制备中应用的研究进展

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非纯化抗原的筛选--细胞筛选法
某些抗原存在难以纯化或抗原不可知性问题，细胞筛选解决了这些难题。
比如Shadidi等用白血病细胞系经过六轮的筛选后，成功地筛选出抗白血病的人单链抗体。
由于细胞表面的抗原表位较多，再加之抗体库中的非特异性克隆，此法筛选容易出现非特异性结合、背景值高等缺点。
用递减筛选法和竞争筛选法可以克服上述缺点。
递减筛选法是将抗体库用不含靶抗原的“空白细胞”先进行阴性吸附，再用靶抗原选择未经吸附的阳性噬菌体；
竞争筛选法则是同时进行阴性选择和阳性选择的方法。
为了减少抗体库中非特异性的克隆，Hawkins等将免疫小鼠的B细胞用抗原进行吸附，然后再扩增抗体基因建库，结果发现用抗原特异性吸附的特异性B细胞所建库中，筛选到阳性克隆的数目是未经抗原吸附细胞的50倍以上。

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非纯化抗原的筛选--组织或体内筛选法

相比于细胞依赖性的筛选方法，核糖体展示和mRNA展示是在体外可从更大的展示文库中更快选择目的抗体的无细胞性筛选。

无细胞性筛选有新生多肽-mRNA一核糖体不稳定性的缺陷：

1996年，Sumida等建立了一种双顺反子技术选择Fab片段。克服了这种缺陷，通过mRNA展示和基因连接微乳液PCR法，结果每轮亲和筛选后可以富集到100倍Fab片段基因。

Pasqulini等报道在体内筛选到针对小鼠脑组织和肾组织特性性靶向肽。

运用到组织学方法上，Tordsson等用冰冻切片筛选到了转移黑色素瘤的冰冻切片。

Binder等用相应B细胞表面受体从噬菌体抗体展示文库中筛选到慢性淋巴细胞白血病抗体。

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非纯化抗原的筛选--高通量筛选法
高通量筛选技术是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机分析处理实验数据，在同一时间检测数以千万的样品，并以得到的相应数据库支持运转的技术体系。
Pissawong等通过噬菌体展示技术获得针对A／H5N1病毒天然保守型M2蛋白单抗HuScFv后，借助噬菌体模拟表位搜索和计算机辅助分子对接技术对单链抗体与抗原反应结构域进行确定反应中离子通道的活性高
低，最终得出的结论为单抗HuScFv减少了病毒的释放和细胞内感染病毒的数量。
Zhang等运用噬菌体展示技术，制备并鉴定了针对EB病毒的重组抗体，并通过荧光辅助细胞筛选，分析所得特异性抗体与HNE2一LMP1结合率为40.35% ，与HNE2细胞结合率为4.15%

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非纯化抗原的筛选--其他筛选法
1998年Bartoli等设计的一种DNA杂交的筛选，是通过不同样品筛选、PCR扩增、生物素标记、单链环状DNA 和噬菌体双链DNA 的杂交，从而被有亲和素的树脂珠捕获的技术。
除了基于传统的免疫学抗原抗体结合筛选原理外，Janda等报道了一种新的筛选方法：功能性筛选，但目前此法还局限于抗体酶的筛选。
为了寻找与肝癌细胞高亲和力、特异性的多肽，赵红蕾等用消减筛选法，与传统的递减筛选法不同的是，先用噬菌体展示肽库与人肝癌细胞HepG2结合，然后再与人正常肝细胞HL-7702结合去除非特异性结合噬菌体肽。

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应用与展望
噬菌体抗体文库在应对疾病中能产生新的抗体，以及针对新型突发疾病能起到关键性的作用。
为了确定艾贝尔森src同源2结构域(Abl SH2)相互作用激酶的单克隆抗体，Wojcik等利用噬菌体展示选择技术，制备了一种叫做HA4的单抗。
Kashyap等在H5N1发生时，在爆发H5N1的火鸡中，从5个活体骨髓内免疫细胞构建噬菌体抗体文库，所建文库产生大于300种能针对H5N1的抗原种独特性抗体。
Binder等运用噬菌体展示技术方法成功地确定了结合到慢性淋巴细胞白血病重链高变区CDR3的不同种多肽，且试验肿瘤细胞样品均特异性的结合。
Meyer等从一些感染了的猪血清中分离、培养鼠伤寒沙门氏菌，通过酶切后1200 bp DNA 片段克隆人载体pHORF3，并最终导人E．coli中，通过超级噬菌体进行富集，再进行PCR，结果发现了新的针对鼠伤寒沙门氏菌的免疫蛋白。
在基础领域方面的研究
Shukla等在确定G蛋白偶联受体“停靠站”结构时，用Fab噬菌体展示文库去选择高亲和力的、能选择性识别β-arrestin-1-V2Rpp(the human V2 vasopressin receptor)复合物。
Saleh等从副肿瘤性天疱疮病人中运用噬菌体展示文库技术，成功展示了抗糖蛋白3单克隆抗体，且对它的致病机制进行了研究，展示结果显示单链抗体的结合域为EC2和EC3，不同于致病性天疱疮以往抗体为EC1结合域。

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在地球上，噬菌体是最丰富、最多样化的生命形态，并对生物圈产生了重大影响。
人们对于噬菌体的不断研究和对噬菌体展示抗体的分子、细胞甚至亚细胞等噬菌体生理功能性研究，相信在不久的将来，通过技术的创新产生新的载体，或者对已有载体进行改造，在噬菌体抗体文库技术中的
关键2个方面(容量和多样性)定能取得突破性的进展。
筛选中的一个缺陷是，随着噬菌体多轮的淘选，某些稀有抗体、亲和力较低抗体常常丢失，且抗体的亲和力较低。而噬菌体文库的多样性越高，筛选到高亲和力配体的成功率就越高。
针对HAMA，随着鼠源抗体人源化改造技术的不断发展，将来或可利用基因敲除技术，直接敲除对鼠源抗体免疫原性基因，从而直接从鼠血清中获得极低免疫原性抗体。
在新药物的研发中，比如目前一些抗原性未知的恶性肿瘤、病毒性疾病等药物的研发，噬菌体展示技术将发挥不可替代的作用。
噬菌体展示技术在被FDA批准的分子新药物的研发和发展中以及临床的其他方面将发生重要的作用，通过调节肿瘤细胞途径和激活体内抵抗癌症的先天性免疫，噬菌体展示的单克隆抗体已经作为一种抗癌药物标准。