High-throughput isolation of immunoglobulin genes from single human B cells

青花瓷

ELISA中用于检测流感抗体的抗原包括：
Fluzone® 2007-2008 (Sanofi Pasteur, Lyon, France),三价灭活流感疫苗
包括A/Solomon Islands/3/2006 (H1N1)样病毒颗粒, an A/Wisconsin/67/2005(H3N2)样病毒颗粒，B/Malaysia/2506/2004样病毒颗粒, 不同毒株的HA（H1 A/Solomon Islands, H3A /Wisconsin, H3 A/Johannesburg ，H5 A/Vietnam）

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从分选细胞中分离出9个抗体轻重链可变区对，组合成一对轻重链的线性表达框，转染细胞后产生的抗体中，5种抗体和灭活疫苗以及一株病毒的(HA) 结合能力很强，而和另一株病毒的HA不结合。

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上清中5种抗体的浓度为0.2-1.3 ug/ml。测序结果显示5种抗体的序列各不相同。

B6为IgA类，另外4个抗体属于IgG类。

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疫苗免疫后血清用ELISA鉴定。
接种疫苗前和21天后的血清用不同的流感病毒株进行结合实验，血清1：800倍稀释，结果显示接种前血清中已预存有针对疫苗的抗体，免疫后，针对某些毒株的抗体滴度增加。

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本研究中，采用体外人工组装线性表达框的方式对功能性抗体进行筛选，鉴定。
读码框包括一个启动子，Ig信号肽，重链或者轻链的可变区，IgG的重链恒定区或者轻链的恒定区，poly(A) 信号序列。
转染细胞后，1ml的上清液足以进行后续的结合实验和中和实验。
从流式分离阳性细胞，到elisa鉴定出功能抗体仅仅需要6天的时间。

黄帮主

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