关于抗体的读文献笔记

青龙偃月刀

免疫剂量过少，不能引起足够强的免疫刺激。
免疫剂量过多，有可能引起免疫耐受。
蛋白质抗原的剂量比多糖类抗原多
小鼠的首次免疫为50-400ug
大鼠为100-1000ug
兔为200-1000ug

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可溶性抗原的免疫方案：
可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂。如果是半抗原还应该先制备完全抗原，再加佐剂。
初次免疫：10-100ug，加弗氏完全佐剂，皮下多点注射，3周后，二次免疫。
二次免疫：10-100ug，加弗氏不完全佐剂，皮下多点注射，3周后，三次免疫。
三次免疫：10-100ug，不加佐剂，皮下多点注射，5天后采血测效价。2-3周后，加强免疫。
加强免疫：抗原剂量200-500ug为宜，腹腔或静脉内注射。3天后取血或者取脾继续进行后续实验。

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颗粒性抗原的免疫方案：
颗粒性抗原免疫性强，如淋巴细胞、肿瘤细胞、细菌等作为抗原，不加佐剂即可以获得免疫效果。
免疫时要求抗原量为1×10^6--2×10^7
初次免疫：1×10^7/0.5ml，腹腔内注射，3周后二次免疫。
二次免疫：1×10^7/0.5ml，腹腔内注射，3周后加强免疫。
加强免疫：1×10^7/0.5ml，腹腔内或者静脉注射，3天后取脾或者血液进行后续实验。

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多抗血清抗体的保存：
① 4℃，将抗血清除菌，液体状态保存，可以存放3-6个月。保存时加入0.1-0.25%叠氮化钠和一定浓度的甘油。
② 低温保存，放在-20到-80℃，一般保存5年效价不会明显下降，分装冻存，避免反复融化。
③ 冷冻干燥，制成品水分不应高于0.2%，封装后可以长期保存，5-10年效价不会明显降低。

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多抗血清的抗体纯化：
① 将血清与 pH=9.0 1M Tris-HCl 混匀，12000r/min 离心 4min，取上清。② 用 20mM 磷酸钠平衡 protein A 纯化柱 2 到 3 次
③ 分多次向纯化柱中加入处理后的血清，控制加入速度在 1mL/min
④ 加入 Elution Buffer 洗脱液，立即收集流出液体，利用 1M Tris-Hcl pH=11.0 溶液调整洗脱液 pH 值在 7.4 至 8.0 之间。
⑤ 利用 PBS 溶液在 4℃下进行透析，透析三次，每次 5h 左右。
⑥ 取少量已纯化的抗体，制样，经 SDS-PAGE 电泳分析。

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腹水用辛酸-硫酸铵法纯化，纯化步骤有：

① 取 1 mL 小鼠腹水，加入 3 mL pH 为 4.0 的醋酸钠缓冲液，浓度为 60 mM，然后用 0.1M NaOH 调 pH 至 4.5；
② 室温下，于小烧杯里 30 min 内边搅拌边加入 33 μL 正辛酸（每隔 10 min 滴 10 μL），然后继续搅拌 30 min；
③ 放置 4℃冰箱静止 1 h，1000 r/min，离心 20 min，收集上清液；
④ 在上清液中加入 1/10 体积的 10×PBS，再用 0.1 M NaOH 调 pH 至 7.4；
⑤ 在冰浴条件下，边搅拌边滴加等体积的饱和硫酸铵，在 30 min 内加完，继续搅拌 30 min；
⑥ 10000 r/min 离心 20 min，弃上清液，用 1×PBS 重悬，转入处理好的透析袋，用1×PBS 进行透析 24 h，收集抗体用于检测或-20℃保存。

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FcN434D是Fc段进行的一个点突变。
突变后的Fc段不和FcRn结合，也不再和细胞内抗体受体TRIM21结合。
可以用于评价抗体Fc段依赖的效应功能作用。

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在Fc端引入LALA 突变即可消除ADE效应

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Fc区域的免疫功能包括激活补体、对吞噬细胞的调理作用、以及抗体依赖性的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）等。

然而，Fc区域效应功能也可能对宿主有害，尤其是针对呼吸道病毒，如呼吸道合胞病毒(RSV)和SARS-CoV，导致抗体依赖性增强(ADE)效应并加重疾病程度。

因此，在临床治疗之前，需要仔细研究引起保护性或病理性后果的NAb机制。

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CD16分子为FcγR III受体