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楼主: 青龙偃月刀

关于纳米抗体的读文献笔记

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 楼主| 发表于 2021-6-12 10:11:36 | 显示全部楼层
本帖最后由 青龙偃月刀 于 2021-6-25 21:59 编辑

Nb和传统抗体的可变区结构类似,由2个β束组成2个β-片层。通过LOOP区的Cys23和Cys104形成常规二硫键进行连接。
人和鼠VH的CDR3平均长度分别为12和9个氨基酸,而纳米抗体CDR3为13~18个氨基酸,在一定程度上弥补了轻链缺失造成的抗原结合力下降;
传统抗体的FR2中,V37、G44,L45和W47这4个氨基酸残基参与VL的相互作用,而在Nb中,这4个氨基酸突变为F/Y37,E/Q44,R/C45,G/F/S/L47,由疏水氨基酸突变为亲水氨基酸,使纳米抗体更易于溶解。
除本身存在的FR1(Cys22)与FR3(Cys92)二硫键外,分子内CDR1(或FR2)与CDR3有一对二硫键,帮助进一步稳定CDR3所成型的凸环结构。


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发表于 2021-6-12 15:21:24 | 显示全部楼层

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 楼主| 发表于 2021-6-20 10:33:03 | 显示全部楼层
Vobarilizumab(ALX一0061)纳米抗体是由抗IL-6R和抗白蛋白纳米抗体耦合而成,通过与IL一6受体相结合,从而用于自身免疫性疾病的治疗。

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 楼主| 发表于 2021-6-20 10:52:15 | 显示全部楼层
本帖最后由 青龙偃月刀 于 2021-6-25 11:45 编辑

从目前进入临床阶段的情况来看,纳米抗体主要以双价、多价、PEG修饰、Fc融合以及白蛋白融合等方法出现,这样不仅可以增加药物的疗效,也可以延长药物半衰期。

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 楼主| 发表于 2021-6-20 10:59:06 | 显示全部楼层
骆驼科共分为3属6种动物,骆驼属包括单驼峰(One-humped Camelus dromedaries)和双驼峰(Two.humped Camelus bactrianus);大羊驼属的3种:美洲驼(Lama glama)、羊驼(Lama vicugna)、原驼(Lama guanicoe);小羊驼属的一种:骆马(Vicugnapacos)。

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 楼主| 发表于 2021-6-20 18:02:59 | 显示全部楼层
本帖最后由 青龙偃月刀 于 2021-6-21 08:53 编辑

纳米抗体作为一个研究工具
作为研究工具的多功能亲和试剂应该很容易产生,靶标特异性好。
有时,亲和试剂需要在不影响靶标的情况下识别所有的构象结构,也可能只识别某一个构象结构,从而能调节和影响到靶分子的功能。好的亲和试剂在不同的细胞室里发挥功能。
reagent should be functioning in different cellular compartments.

Nbs like many other affinity reagents fit perfectly
in this picture. Their high specificity for one
particular conformation of the Ag makes that the crystallisation
of the Nb-Ag complex is highly successful,
even for dynamic molecules [103]. As a result, well over
200 protein crystal structures were solved, of which the
vast majority of proteins failed to have their structure
determined at high resolution [114]. Nbs were also
instrumental to identify the interaction side of subdomains
of large proteins or to investigate in real time the
protein–protein interactions within a cell and for superresolution
microscopy [94,115,116]. The function of
native enzymes has been knocked out or modified, even
intracellularly, after direct Nb binding, by mediating the
proteolysis of the Ag [97,99], by its rerouting to other
cellular compartments or by keeping the Ag at a location
where it is not functioning [101,117,118]. Such functional
knockouts are of significant interest in cell
biology or in unveiling the life cycle of infectious pathogens.
Also tracking and the study of the dynamics of the
Ag inside cells became feasible with chromobodies or
LlamaTags, obtained after intracellular expression of a
Nb-fluorescent protein gene construct [92,119].


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 楼主| 发表于 2021-6-25 12:14:30 | 显示全部楼层
纳米抗体对人体的免疫原性较弱, 且与人的生物相容性好。
经比较, 骆驼的V H H 胚系基因序列与人的V H 3 序列高度同源.
不同的地方主要有两点: 一是骆驼的VHH的CDR3长度比人的稍长, 二是VHH与人VH表面大概只有10 个氨基酸不同。因此可对骆驼v H H 进行简单的改造从而使其人源化。

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 楼主| 发表于 2021-6-25 22:10:10 | 显示全部楼层
单峰驼Nb的CDR3区平均长度约为17个aa。
美洲驼Nb的CDR3区平均长度约为15个aa。
某些纳米抗体中CDR3的长度超过25个aa。最短也有7个aa的。
人和鼠的重链可变区的CDR3区约含9-12个aa。
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 楼主| 发表于 2021-6-25 22:14:46 | 显示全部楼层
单域抗体较长的CDR3可以形成一个突起的环区,可以识别常规抗体无法接触的位点。如:酶蛋白裂隙活动中心,病毒与宿主细胞的凹槽,某些隐藏的凹表位等。


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 楼主| 发表于 2021-6-25 22:45:43 | 显示全部楼层
单域抗体对温度具有较高的耐受性,对于尿酸,乳酸铵,蛋白酶和极端pH环境也有一定的耐受性。
由于单域抗体在苛刻条件下依然能保持良好的稳定性,其在胃液和内脏中能存留较长时间。
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