MYC的纳米抗体

青花瓷

01020：
市场上针对c-Myc标签融合蛋白纯化用的亲和柱和亲和磁珠，偶联的配基大都是单克隆抗体或多克隆抗体。
现有的针对c-Myc标签融合蛋白纯化的亲和柱和亲和磁珠价格普遍偏高。
纳米抗体可以在大肠杆菌、酵母等生物中大量表达，有利于降低相关制品的生产成本。
蛋白纯化过程中需要用到酸或碱性溶液对目的蛋白进行洗脱，酸碱洗脱会不可避免的导致抗体活性降，因而不能重复使用。
纳米抗体仅由一个结构域组成，具有耐酸碱、耐高温的特性。

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c-Myc标签蛋白的发现源于1985年Evan制备获得了一株针对人原癌基因产物Myc蛋白的单克隆抗体9E10，此后研究发现该抗体识别的表位由10个氨基酸残基组成，其序列为Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu。
这10个氨基酸与其它蛋白融合表达后依然能够保持很强的抗原活性，可以被相应抗体识别，而且不受到蛋白框架的影响。
c-Myc标签系统广泛应用于免疫学检测、细胞成像、亲和纯化以及蛋白质工程等领域。

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免疫库的制备：
将c-Myc标签与牛血清白蛋白共价偶联，得到c-Myc-BSA，取300μg c-Myc-BSA与弗氏完全佐剂乳化后，对羊驼进行皮下多点注射免疫。加强免疫采用150μg c-Myc-BSA与弗氏不完全佐剂乳化，间隔2周进行，每次免疫7天后静脉取血，采用间接ELISA法测定血清效价，选择血清效价最高的样品分离淋巴细胞，提取RNA。

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筛选得到的抗myc纳米抗体氨基酸序列：
01020中序列
QLQLVESGGGEVNPGGSLTLSCVASGFPFGINIMSWVRQVPGKEPEWVAGIDNGGRRTTYADSVRGRFTISRDNDKNTLYLQLDNLQPNDTALYYCSRQGWGQLPAKRYWGKGTLVTVSA
01015中序列
QLQLVESGGGLVRPGESLRLSCDASSSEPPLLAYVVSWFRQVPGKEREGISCSSSSGVRNSYADSVKGRFTISRDNHKNTVYLQMNSLQAEDTAIYYCAAARLGARGCDFREDLQGTWGQGTQVTVSS

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C-myc纳米抗体的应用：
标签免疫亲和磁珠，以纳米磁珠作为载体；
标签免疫亲和吸附材料及亲和柱的制备
① 以琼脂糖微球作为载体；
② 以硅胶微球作为载体；