双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库的构建与鉴定

青花瓷 · 发表于 2023-5-15 20:34:54

VHH制备技术包括：
噬菌体展示技术
酵母展示技术
核糖体展示技术
01018 2015 畜牧兽医学报

青花瓷 · 发表于 2023-5-15 20:50:40

噬菌体展示抗体库缺点：
使用原核表达系统将抗体展示在噬菌体表面，缺乏翻译后修饰能力，可能会引起抗体活性降低，导致假阴性结果出现，同时其筛选过程是在体外进行的，不适合研究抗原抗体在细胞内反应活性。

青花瓷 · 发表于 2023-5-15 20:58:24

实验材料：
Y187酵母菌，pGADT7-Rec线性化载体（Clontech）
6月雌性双峰驼
Ficoll Paque PLUS淋巴细胞分离液
SD-leu选择性培养基，YPDA培养基

青花瓷 · 发表于 2023-5-15 21:19:29

本帖最后由青花瓷于 2023-5-15 21:22 编辑

两对引物来扩增：
CALL01/CALL02扩增的条带：
VH-CH1-CH2 900bp
VHH-CH2 600bp
VHH-UP/VHH-DOWN
扩增得到400bp的条带VHH
（FR1-FR4区）

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