RSV的纳米抗体

青花瓷

20005：
免疫原三种，① 重组三价的RSV F蛋白；② H5N1血凝素 (H5, A/Vietnam/1203/2004) ；③ 灭活的狂犬疫苗病毒。
前两种抗原免疫周期为六周，使用免疫原分别为RSV和H5N1，前两次用量为40ug，后四次用量为20ug。
狂犬灭活病毒免疫周期为5次，前后有57天。
首次免疫后第七周时收集150ml的血液，分离淋巴细胞，提取RNA，构建了免疫库，库容量约10^8。
Synagis(PalivizuMab, MedImmune Inc.,人源化的IgG1k单抗)用于和RSV F蛋白竞争性洗脱得到VHH。
狂犬病毒的G蛋白用于筛选针对狂犬病毒的VHH。
狂犬特异性鼠单抗IgG2a 8-2 (EBL-1，基因5型) 用于竞争洗脱抗狂犬病毒G蛋白的单域抗体。

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帕利珠单抗(Palivizumab，商品名Synagis)
靶向呼吸道合胞病毒RSV的人源化单抗，属于儿科领域的“重磅药”。帕利珠单抗可通过结合病毒表面上的RSV融合蛋白而阻断膜融合过程，也可以阻止被RSV感染的细胞间的融合过程，该抗体药物主要用于预防小儿呼吸道合胞病毒(RSV)感染。
Wu等人应用定向进化方法来改善帕利珠单抗与RSV F蛋白的结合率（kon）和解离率（koff），并发现通过增加kon来提高亲和力可以改善单抗IgG形式的病毒中和作用，但是在提高抗体亲和力的同时需要同时充分考虑抗体的PK特性和组织的生物利用度。

青花瓷

分离病毒刺突蛋白的单域抗体：
进行了两轮筛选，筛选到188个克隆，其中149个能识别RSV。94个克隆能识别狂犬病毒G蛋白，56个克隆能识别H5血凝素蛋白。
筛选到的克隆分别和Synagis，mAb 8-2或者是流感病毒的唾液酸进行竞争ELISA实验。
最终，构建了抗RSV的3个双价纳米抗体和4个双特异抗体。抗H5N1的4个双价纳米抗体，两个三价抗体。抗狂犬病毒的四个双价抗体和四个双特异抗体。
构建抗体用的linker长度约9-35aa。纯化后的抗体浓度能达到0.5-1mg和单价单域抗体相比较，产量提高了3-10倍。