从纯化到星辰，蛋白纯化文献笔记

青花瓷

从纯化到星辰 蛋白质纯化笔记
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resin重悬成50%的slurry，
先封闭柱子的下出口，往柱子里面加入10%体积的buffer。
倒slurry的时候还得用玻棒引流，这样可以尽可能的避免气泡。
resin沉降30min后，打开柱子的下出液口，让多余的缓冲液流出去。
可以防止resin 不均匀，避免产生一大堆气泡。

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测试凝胶过滤层析柱是否成功装柱，使用蓝色葡聚糖(blue dextran)进行验证。
蓝色葡聚糖是带有蓝色染料的多糖高分子聚合体，体积非常大，所以在空体积(void volume，即树脂之外的空隙容积)可以洗脱出来，这一步实验作用有三。
① 确定void volume，知道这个空体积是很重要的。因为每次装柱子，实际resin的总体积都会有微小的不同。特定蛋白在柱子的洗脱体积与空体积的比值是一定的，所以只要知道了空体积，就能知道蛋白大概会在什么时候洗脱出来。
② 可以确定样品会被稀释多少。
③ 可以判断柱子是否装的均匀。如果装的不均匀，葡聚糖就会跑得形状怪异。

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蛋白活性鉴定：

① 凝胶迁移率变动分析


② DNA水解酶I足迹分析

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去垢剂是一类具有特殊结构的化合物,能够破坏细胞膜中的磷脂双层结构,使跨膜蛋白从膜上解离。通过添加适量的去垢剂,可以有效地实现跨膜蛋白的分离。
如：Triton X-100， Sodium Cholate胆酸钠， Chaps，和Octyl glucoside辛基葡糖苷。

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Amersham 的 XK26/40的空柱子，然后往里面填充Sephacryl S-300 HR 的树脂。
用于凝胶过滤层析。
Sephacryl S-300 HR 的树脂的分辨率比Superdex要低。